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第34卷第6期 家畜生态学报 V01．34NO．6 2013年6月 Acta AnimalisDomastici Ecologiae Jun．2013 不同浓度玻璃化冷冻液对牛未成熟卵母细胞 发育能力的影响 栗颖华1，禹学礼1，张德勋2，陈君怡1，许亚坤1，李晓霞1，昝林森3。 (1．河南科技大学动物科技学院，河南洛阳471003；2．洛阳巨尔乳业有限公司，河南洛阳471031； 3．西北农林科技大学动物科技学院，陕西杨凌712100) [摘 要] 旨在研究含不同浓度乙二醇(EG)、二甲基亚砜(DMSO)的玻璃化冷冻液对牛未成 熟卵母细胞冷冻后发育能力的影响。将卵丘卵母细胞复合体(COCs)置于不同配方的玻璃化 DMSO)中暴露30S或60S，体外成熟培养22h，以未在玻璃化冷冻液中暴露而直接体外成熟 22h的COCs为对照组。结果表明，在VS3中暴露60S时，成熟率比对照组明显下降(P 液可以用于牛未成熟卵母细胞的冷冻，COCs在冷冻液中处理的时间应控制在30s内。 [关键词]牛；卵母细胞；玻璃化冷冻液 [中图分类号]$811．6 [文献标识码]A [文章编号] GV期卵母细胞冷冻具有重要的科学意义和应 透压的变化Ⅲ及冷冻保护剂的化学毒性睁63而对细 用价值。在人类医学领域，GV期卵母细胞冷冻保 胞造成损伤。因此，不同冷冻保护剂对细胞毒性、不 存可以为放疗癌症患者、卵巢摘除患者保存生殖能 同冷冻保护剂的配比是牛GV期卵母细胞冷冻的研 力；在畜牧领域，未经成熟培养的GV期卵母细胞现 究热点之一。 场冷冻可以避免长时间运输对卵母细胞造成的不良 本文拟在相关研究的基础上，探索不同玻璃化 影响，为胚胎生物技术研究提供充足的试验材料。 冷冻液对牛卵丘卵母细胞复合体(cumulusoocyte 目前，卵母细胞的冷冻效率非常低，且大多以MII 期卵母细胞为冷冻对象，牛MII期卵母细胞经冷冻 能力的影响，从而检测常用的几种玻璃化冷冻液对 卵母细胞的毒性，并筛选出最佳的牛GV期卵母细 后再体外受精，囊胚率11％～25％[13；而GV期卵 母细胞对冷冻更敏感，一直被视为生物材料的“冷冻 胞玻璃化冷冻液。 禁区”，直到近些年采用玻璃化冷冻才获得成功，冷 1材料与方法 冻后成熟率仅为19％～2l％，囊胚率仅为1％～ 1．1 材料 5％[2]。影响牛GV期卵母细胞玻璃化冷冻效果的 因素众多，玻璃化冷冻液是最重要的影响因素之一。 1．1．1 卵母细胞从宰杀后的牛体内取出卵巢，置 mm的 玻璃化冷冻液的特点是必须添加高浓度冷冻保护 于30℃的PBS中运到实验室；从直径2～8 剂，冷冻中虽然高浓度冷冻保护剂可以降低冰晶的 卵泡中抽吸COCs，在体视显微镜下拣出，根据试验 形成，从而减少冰晶对细胞的损伤口]，但是也会因渗 设计随机分组。精液为洛阳白马寺种公牛站生产的 [收稿日期]2013—04—13；修回日期：2013—05—17 [基金项目] [作者简介] *[通讯作者] 万方数据 第6期 栗颖华，等：不同浓度玻璃化冷冻液对牛未成熟卵母细胞发育能力的影响 37 细管冷冻精液。 察，第一极体排出、细胞核达到MII期者为成熟卵