用绿色荧光蛋白监测转基因植物中选择标记基因的消除.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # %’ (! ) ( # 年 月 !$ # !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 *+,-+./ !$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 用绿色荧光蛋白监测转基因植物中选择标记基因的消除 ， ， # # ! # 0 # # 贾洪革 吕玲飞 庞永奇 陈晓英 方荣祥 # （中国科学院微生物研究所植物生物技术实验室，北京 #4 ） ! （北京师范大学生命科学学院，北京 #469 ） 0 （西北农林科技大学生命科学学院，杨凌 6#!# ） 摘 要 绿色荧光蛋白（ ）可直接进行活体观察，它的这个优点可被用于监测转基因植物中选择标记基因的消 D:E 除。为此，构建了植物表达载体 ，将绿色荧光蛋白基因（ ）和卡那霉素抗性基因表达盒（ ）一 FD)D 1-3 )BE1 $3/44 1)B7 起克隆在两个同向的 位点间，在第一个 位点上游置有 启动子以驱动 表达，第二个 位点下 ,(5 ,(5 G+H% 09I D:E ,(5 游置有不含启动子的大肠杆菌 葡萄糖醛酸酶（ ）基因。首先在含卡那霉素（ ）的培养基上筛选出转 1 DJI K+, FD)D ! 的烟草，借助绿色荧光可容易地检出表达D:E 的转化体。然后用另一转化载体FG+=L+#01G.8 二次转化表达D:E 的转基因植物，利用另一选择标记基因潮霉素抗性基因（ ）进行筛选，在获得的再生植株中， 重组酶的表达消 1 3/ G.8 除了转化体中两 位点间的 和 。实验结果表明可借助 荧光的消失，快速选出 被消除的二次转 ,(5 1-3 $3/44 D:E $3/44 化体，同时 （作为目的蛋白）在 启动子驱动下获得表达。最后利用后代的分离将 和 除去。 DJI G+H% 09I 3/ 0*% 关键词 选择标记基因，转基因植物，绿色荧光蛋白 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） M64 5 #102# !$ #1#12 近年来，利用转基因技术改良作