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山东省新泰市第二中学高中生物 1.1 DNA重组技术的基本工具教学案 新人教版选修3 一、教学目标 1、简述DNA重组技术所需三种基本工具的作用 2、认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新 二、教学重点和难点 1、教学重点：DNA重组技术所需的三种基本工具的作用 2、教学难点基因工程载体需要具备的条件 三、教学过程 1、基因工程的原理：基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外 和 ，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在 水平上进行设计和施工的，因此又叫做 。 2、限制性核酸内切酶 （1）切割DNA的工具是 ，又称 。 （2）这类酶在生物体内能将外来的DNA切断，即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力，但对自己的DNA却无损害作用，这样可以保持细胞原有的遗传信息。 （3）由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性核酸内切酶（简称限制酶）。 （4）DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段，末端通常有两种形式，即 和 例、下列关于限制酶的说法正确的是（ ） A、限制酶广泛存在于各种生物中，但微生物中很少 B、一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C、不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端 D、限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键 3、DNA连接酶——“分子缝合针” 根据DNA连接酶的来源不同，可以将它分为两类： 一类是从大肠杆菌中分离得到的，称为DNA连接酶。DNA连接酶只能将 连接起来，不能将双链DNA片段平末端之间进行连接。 另一类是从 分离出来的，称为T4DNA连接酶。T4DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的 ，又可以“缝合”双链DNA片段的 ，但连接 之间的效率比较低。 例、右图为DNA分子的切割和连接过程。 (1)EcoRI是一种 酶，其识别序列是 ，切割位点是 与 之间的 键。 切割结果产生的DNA片段末端形式为 。 (2)不同来源DNA片段结合，在这里需要 的酶应是 连接酶， 此酶的作用是在 与 之间 形成 键，而起“缝合”作用的。 还有一种连接平末端的连接酶是 4、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” （1）基因操作过程中使用载体两个目的：一是用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去；二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制。 （2）现在通常使用的载体是 它是一种相对分子质量较小、独立于拟核DNA之外的环状DNA，有的细菌中有一个，有的细菌中有多个。 （3）质粒通过细菌间的接合由一个细菌向另一个细菌转移，可以 复制，也可整合细菌拟核DNA中，随着拟核DNA的复制而复制。 （4）其他载体还有 和 等。 （5）作为载体必须具备以下条件： 能够在宿主细胞中复制并稳定地保存，具有多个限制酶切点， 以便与外源基因连接；具有某些标记基因，便于进行筛选，如对抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。 例、以下是两种限制酶切割后形成的DNA片段，分析回答问题。 (1)其中①和 是由一种限制酶切割形成的 末端，两者要重组成一个DNA分子，所用DNA连接酶通常是 。 (2) 和 是由另一种限制酶切割形成的 末端，两者要形成重组DNA片段，所用DNA连接酶通常是 。 四、课堂巩固 1、(A)关于限制酶的说法中，正确的是（ ） A、限制酶是一种酶，只识别GAATTC碱基序列 B、EcoRI切割的是G—A之间的氢键 C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA D．限制酶只存在于原核生物中 2、(A)DNA连接酶催化的反应是( ) A．DNA复制时母链与子链之间形成氢键 B．黏性末端碱基之间形成氢键 C．两个DNA片段黏性末端之间的缝隙的连接 D．A、B、C都不正确 3、(B)作为基因的运输工具——载体，必须具备的条件及理由是( ) A、能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因 B、具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达 C．具有某些标记基因，以便为目的基因的表达提供条件 D、能够在宿主细胞中复制并稳定保存，以便于进行筛选 4、(B)质粒是基因工程最常见的载体，它的主要特点是( ) ①能自主复制 ②不能自主复制 ③结构很小 ④是蛋白质 ⑤是环状RNA ⑥是环状DNA ⑦能“友好”地“借居” A、①③⑤⑦ B、②④⑥ C．①③⑥⑦ D．②③⑥⑦ A、目的基因上有标记 B、质粒具