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大丽菊花瓣衰老相关蛋白质组及XET基因的研究 中文摘要 大丽菊花瓣衰老相关蛋白质组及XET基因的研究 中文摘要 ·?大丽菊(DahliapinnataCar)因花型丰富、花色多样及色彩鲜艳而极具观赏性，在园 林植物栽培与鲜切花中被广泛运用。但大丽菊花瓣易衰老萎蔫，在自然条件下，单花盛 花期较短，最佳观赏期仅4-5天。因此，有关大丽菊花瓣衰老机理及其调控技术的研究 历来受到人们的重视，对调节大丽菊切花保鲜、提高观赏价值具有理论指导意义。 本文以大丽菊单瓣型、黄色类品种为实验材料，建立了花瓣蛋白质的双向电泳及 差异蛋白质组学技术体系，研究了大丽菊不同开花时期花瓣蛋白质的差异表达与保护 酶活性的时期变化，并对差异表达蛋白质进行了鉴定与分析，进一步克隆了大丽菊衰 老相关蛋白一木葡聚糖内糖基转移酶(XET)基因的cDNA全长序列，取得如下主要实 验结果： ． 1．在优化大丽菊花瓣蛋白质样品制备技术的基础上，应用ⅢG咂F|／sDS张GE (2-DE)方法，对大丽菊衰老过程中不同时期的花瓣蛋白质进行了分离，获得了清晰、 2D．图谱分析软件对双向电泳图谱进行了分 稳定的双向电泳图谱，采用ImageMaster 析，共检测到1240个蛋白质斑点，其中表达量差异在2倍以上的有44个；其次，在 表达量差异大于1．5倍的蛋白质斑点中，衰老过程中总体呈下降趋势的占52．4％，而 在衰老后期表达量增加的占45．1％。 2．从2-DE凝胶上选择表达量有显著差异的16个蛋白斑点，经胶内酶切、质谱 分析及数据库搜索，成功鉴定了其中的11个差异蛋白质组分。现有研究成果表明， 这些差异蛋白质分别涉及物质与能量代谢、自由基清除与抗氧化作用、细胞骨架形成 及信号转导等生理过程，可能与大丽菊花瓣衰老过程的调控有关。 3．根据差异蛋白质的鉴定结果，采用紫外分光光度法，研究了过氧化氢酶(CAT) 在大丽菊花瓣衰老过程中的活性变化。同时，分别采用氮蓝四唑(NBT)法和愈创木酚 法，分析了同属于保护酶系统的超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化物酶(POD)的活性变 化。结果表明：随着花朵的开放和衰老，CAT活性呈先上升后下降的趋势，这与双向 电泳图谱中CAT表达量的变化趋势相一致；SOD活性变化与CAT相似，而POD活性表 现为前期下降、后期上升的变化趋势。 4．根据差异蛋白质的鉴定结果，在大丽菊花瓣衰老过程中首次发现木葡聚糖内 中文摘要 大丽菊花瓣衰老相关蛋白质组及XET基因的研究 糖基转移酶(XET)显示差异表达的特征，其表达量呈现逐渐增加的变化趋势，推测可 能是与衰老机理有关的新的功能蛋白质。应用生物信息学与分子生物学实验技术，克 隆了大丽菊XET基因的cDNA全长序列，该序列大小为882 bp，编码293个氨基酸； 聚类分析表明，克隆的大丽菊XET的cDNA序列与供试的12种双子吐植物的同源 性较高，且XET蛋白的氨基酸序列具有较高的保守性。 关键词：大丽菊；衰老；差异蛋白质组；保护酶活性；基因克隆 作 者：阚雪芹 指导教师：谈建中 Ⅱ On differentialand associatedwitll in Car Study proteome XETgene petals翻奠le翻渤ceDahliapinnata ondifferentialandXETassociated Study proteome gene with in senescenceDahlia Cav petals