甘草甜素对脓毒血症引起急性肺损伤的保护作用及机制及.pdf

上海交通大学医学院硕士论文 甘草甜素对脓毒血症引起的急性肺损伤的保护作用 及机制研究 摘 要 急性肺损伤（acute lung injury, ALI）是一种临床上常见的危重 症，死亡率高达35%～40%，至今尚无十分有效的治疗药物。目前的研究 认为过度的炎症反应和氧化应激是主要发生机制。脓毒血症是引起 ALI 的主要原因之一。从甘草中分离出来的三萜类有效成分--甘草甜素 (glycyrrhizin,GL),具有抗炎、抗病毒、抗癌、抗凝血、免疫调节和抑 制自由基的产生等作用。目前，有关甘草甜素对脓毒血症引起的急性肺 损伤的作用及机制研究较少。 第一部分 甘草甜素对大鼠脓毒血症引起的急性肺损伤 的保护作用 目的： 观察甘草甜素对大鼠脓毒血症引起的急性肺损伤的保护作 用。 方法： 采用尾静脉注射脂多糖(LPS)建立大鼠脓毒血症引起的 ALI 模型。雄性SD 大鼠30 只,随机均分为5 组：正常对照组(CON组)、模型 组(LPS组，尾静脉注射LPS 7.5 mg/kg)、GL 处理组(GL1、GL2、GL3 组， I 上海交通大学医学院硕士论文 分别腹腔注射GL 30 mg/kg、60 mg/kg、120 mg/kg，10 min 后尾静脉注 射LPS 7.5 mg/kg)。LPS 注射后12 h，测定各组大鼠支气管肺泡灌洗液 (BALF)中白细胞总数、IL-6 的浓度、总蛋白的含量，肺组织髓过氧化物 酶（MPO）的活性和湿干重比值，并观察肺组织病理学变化。 结果: 与CON 组相比，LPS 组BALF 中白细胞总数、总蛋白含量、IL-6 的浓度，肺组织MPO 的活性和湿干重比值明显增加（P0.05）；LPS 组 肺组织切片观察见明显的炎细胞浸润、肺泡及间质充血、水肿。与 LPS 组相比，GL1、GL2、GL3 组BALF 中白细胞总数、总蛋白含量、IL-6 的浓 度、肺组织MPO 的活性和湿干重比值均降低（P0.05）；病理学损伤也 减轻。GL3 组损伤减轻较GL1、GL2 组更为明显（P0.05）。其中GL3 组 BALF 中白细胞总数、总蛋白含量、肺组织MPO 的活性均低于GL1 和GL2 组（P0.05）；GL3 和GL2 组BALF 中IL-6 的浓度低于GL1 组（P0.05）。 结论：GL 能够减轻脓毒血症引起的炎性细胞浸润和肺泡毛细血管屏 障损伤，从而对ALI 具有保护作用，且在30~120mg/kg 范围内随剂量增 加效果更明显。 第二部分 Toll 样受体4 在脓毒血症引起的急性肺损伤 模型中的表达及甘草甜素对其的影响 目的: 观察大鼠静脉注射LPS 后肺组织中TLR4 的表达及GL 对其的 影响。 II 上海交通大学医学院硕士论文 方法: 采用尾静脉注射LPS 建立大鼠脓毒血症引起的ALI 模型。为 了观察LPS 注射后不同时间点肺组织中TLR4 的表达，雄性SD 大鼠15 只, 随机均分为5 组：正常对照组(CON组)、LPS 模型组I、II、III、IV （I、 II、III、IV 组，分别于注射LPS 后6h、12h、18h、24h 处死大鼠取肺 组织样本）。通过real time PCR 和Western boltting 方法检测大鼠肺 组织中TLR4mRNA 和蛋白的表达水平。为了观察GL 对LPS 引起的大鼠肺 组织中TLR4 的表达变化的影响，雄性SD 大鼠15 只,随机均分为3 组： 正常对照组(CON组)、LPS 模型组（LPS 组,尾静脉注射LPS 7.5 mg/kg）、 甘草甜素处理组（GL 组, 腹腔注射GL 120mg/kg，10min 后静脉注射LPS 7.5 mg/kg）。所有大鼠于12h 后处死，取肺组织用与上述相同的方法检 测TLR4mRNA 的表达。 结果: 与CON 组相比(1