相关基因多态性和甲氨蝶呤治疗风湿性疾病疗效及不良反应的相关性的研究.pdfVIP

摘要 (influx．metabolism—efflux 的多态性对MTX治疗白血病、风湿性疾病的疗效都有影响。另外，MTX发挥 药理作用通路上关键的调节酶——亚甲基四氢叶酸还原酶 (methylenetetrahydrofolate 响报道不一。目前，中国人群中关于MTX转运代谢通路上的MDRlC3435T、 1 1 15441 RFCG80A、GGHC一40 C677T和MTHFR T、FPGS(rs05)GA、MTHFR A1298C等6个关键基因多态性对MTX治疗风湿性疾病的疗效和对红细胞内 MTXPGs浓度的影响尚不清楚。 N伍RlC3435T、RFClG80A、GGH C677T和MTHFRA1298C基因的PCR—RFLP方法的基础上，运用该法测定风 湿患者红细胞内MTXPGs浓度和上述6个位点的基因型，分析红细胞内 MTXPGs浓度和MTX治疗风湿性疾病疗效、不良反应间的相关性，探讨上述6 个基因多态性对红细胞内MTXPGs浓度和对MTX治疗风湿性疾病疗效及不良 反应的影响，为合理使用MTX治疗风湿性疾病提供理论依据。 和MTHFR基因型研究 目的： G80A、GGHC一401T、 研究中国风湿性疾病患者群中ⅧR1C3435T、l强Cl FPGS(rsl544105)GA、MTHFR 与其他种族进行比较，明确种族差异。 方法： 3435、RFCl 用PCR-RFLP的方法检测分析MDRl 80、GGH．401、FPGS(rs 677和MTHFR1298五个基因6个位点在中国风湿患者群中 1544105)、MTHFR 的分布情况，并验证是否符合Hardy-Weinberg平衡，同时和其他种族基因突变 频率与等位基因频率的分布进行比较。 Ⅲ 摘要 结果： 3435C64％，MDRl3435T36％；RFCl 6个位点等位基因频率如下：MDRl 80G51％，I心C180A49％；GGH．401C81％，GGH．401T19％；FPGS 677C 677T 74％：MTHFR73％，MTI--IFR (rsl544105)G26％，FPGS(rsl544105)A 1298A79％，MTHFR1298C 27％；MTHFR 21％。各个基因型都符合 Hardy-Weinberg平衡。 结论： 除了MTHFR677的突变频率较低外，本研究风湿患者群中的各基因频率 与已报道的北京健康志愿者基因频率相似。各基因频率与其他种族间存在种族 差异。 第二部分 红细胞内甲氨蝶呤谷氨酸聚合物LC／MS／MS分 析方法的建立 目的： ：建立LC／MS／MS分析法测定人血红细胞中甲氨蝶呤谷氨酸聚合物浓度。 方法： C37(2孵育3h 采用液质联用电喷雾检测法(LC／MS／MS)。全血经Vitamin 得到甲氨蝶呤总浓度，不经VitaminC孵育处理的即为原型甲氨蝶呤浓度，全 血甲氨蝶呤谷氨酸聚合物浓度=总甲氨蝶呤浓度一原型甲氨蝶呤浓度。再根据体 积比换算为红细胞内甲氨蝶呤谷氨酸聚合物的浓度。提取方法用液液萃取的方 法，先用三氟乙酸蛋白沉淀，再用乙酸乙酯提取。样品经电喷雾离子源正离子 化后，