拟南芥绒毡层关键转录因子AMS控制花药发育的机理与研究.pdfVIP

囝躐缝 博士后研究工作报告 拟南芥绒毡层关键转录因子AMS控制花药发育 的机理研究 摘要 花药发育过程涉及细胞分化、减数分裂等一系列复杂过程，其中绒毡层 细胞对花药发育起重要作用。绒毡层细胞需要经历一个细胞程序性死亡 Cell (Programmed 提供必需的营养物质。但是，人们对绒毡层细胞PCD过程以及这个过程是如 何影响花粉外壁发育的调控机理知之甚少。我们已经知道在拟南芥花药发育 码bHLH类转录因子，且该基因的缺失后会导致花粉不能正常形成，最终导致 雄性不育的发生。但AMS是如何参与花药发育调控的过程我们仍不是很清楚； 因此，本研究以模式生物拟南芥为实验材料，以AMS基因为研究对象，采用 形态学、分子生物学、遗传学和生物信息学等方法手段，在DNA、RNA和蛋白 质等水平上，来系统的研究和分析AMS在花药发育的过程中的主要作用，以 此阐述植物花药发育和花粉形成过程中的发生的可能分子机制。 Electron 本研究中，我们首先使用透射电镜(Transmission Microscopy， Electron TEM)、扫描电镜(Scanning 察等方法，对ams突变体进行细致的形态学分析，结果表明AItS突变后，会 导致绒毡层细胞发生异常膨大、正常的PCD过程受阻、不能正常形成花粉外 壁、而最终导致花粉的完全败育(雄性不育的发生)。我们同时利用全基因 国躐拦 似一懈 组表达谱芯片分析，表明2JtS基因突变后，会对花药发育过程中的至少549 of 0rthologousGroups 发生改变的549个基因进行KOG(Eukaryotic proteins)和GO(Gene 会影响绒毡层细胞的PCD过程相关基因的转录水平发生改变，同时还对花粉 发育过程中的脂类物质形成和代谢产生类基因的转录水平产生重要影响；因 此，形态学观察和转录组分析都表明，AMS基因在拟南芥花药发育的过程中 的生物学功能，可能主要包括：参与调控绒毡层细胞PCD过程，以及花粉外 壁(脂类成分)的形成过程两个方面。 为了进一步寻找AMS可能直接调控的基因，我们还通过体外DNA结合实验 (DNA binding 调控元件结合；并进一步通过全基因组转录组基因信息分析，查找allls突变体 中发生下调基因启动子区域E—box的存在和分布情况，采用植物体内染色质免 疫共沉淀(Chromatin 接调控13个花药中重要功能基因，这些基因主要参与脂类、寡肽及离子的运 输，脂肪酸的合成及代谢等重要的花药发育的生物学过程。并通过突变体 Mobility Shift 白家族)可以直接被AMS在DNA水平上结合并调控，该基因的缺失同样会导致 类似于ams的花粉败育和雄性不育的发生，从而证实体内ChlP实验的可行性和 可信度。同时，在蛋白水平上，也通过酵母双杂(Yeast 和Pull n @删盛 慨～懈 AtbHLH091)及功能蛋白ATA20存在相互作用。 最后，为了进一步更加全面的了解AMS的生物学功能，我们还使用基因 工具，在全基因组水平上寻找AMS直接调控的基因，来进一步阐明AMS在绒 毡层的PCD过程以及花粉外壁的形成的调控机制，结果同样表明，AMS可