一个新的白细胞膜抗原ZCH-2B8a编码基因及其生物学特性和研究.pdf

英文缩略词表 一个新的白细胞膜抗原 zcH一288a编码基因及其生物学特性的研究 摘 要 血液系统恶性肿瘤是当今医学七的顽症之一，细胞膜表面分化抗原(cD)分子的研 究能提高对其生物学行为的认识，有利于诊断治疗。通过单克隆抗体(单抗)进而研 childrerrS 究细胞膜抗原生物学特性是蛋白质功能研究的重要方法。zcH(zhejiang 单抗，已经提交第8届国际人类白细胞分化抗原协作组会议(HLDA8)鉴定，根据 HLDA8总部经大量研究的反馈信息表明：该抗体识别的抗原性质不明，属国际上尚 未认识的血细胞膜新的分化抗原(新的cD分子)。因此，对其识别抗原编码基因克 隆与测序及其生物学功能研究有着重要的科学意义和潜在的应用前景。 l直标鼠抗人新单抗zCH一288a—FITC的研制及鉴定 为了深入研究ZCH，288a抗体识别抗原的表达谱及生物学功能，有利于利用流式 细胞仪作多色分析和抗原阻滞试验，减少实验误差，拟将该抗体研制成异硫氰酸荧光 素(Fluorescein 小鼠腹腔内注射1x 备成功。 2 2 zcH一288a单抗及其识别抗原的生物学特性 为了阐明288aAb及其抗原的功能和临床应用前景，对抗原和抗体的有关生物学 特性进行了初步探讨。 (1)288aAb与正常和恶性肿瘤细胞的反应性： 在外周血B细胞上表达(3／3例，平均阳性细胞数为26．29％)，而在T淋巴细胞和 NK细胞上不表达(O／3例)：在粒细胞和单核细胞上阳性表达率均为2／3例，平均阳 胞系HR8348细胞上均不表达，而在羊膜细胞系FL细胞上呈一定的阳性表达，平均 和cML中表达率仅为3／57和0，5，与淋巴细胞性白血病比较差异具有极显著性意义 周血单核细胞、B细胞和粒细胞及骨髓CD34+造血于细胞上表达；在B系白血病和 淋巴瘤细胞、单核细胞自血病细胞和上皮性肿瘤细胞上表达。 (2)288矾g对胰酶消化的抵抗能力： 的高表达降至26．99％，提示288以b识别的抗原性质可能是蛋白结构，而非糖基之 类的分子。 (3)288aAb对Nalm．6细胞生长的影响： O，265和0．763)，说明288aAb对Nalm．6细胞生长无影响。 (4)288aAb与耐药和非酬药白血病细胞株之间的反应性比较： 蝌药株上的低表达规律提示288aAg可能与耐药程度有关，其机理尚需进一步研究。 3 ZCH一288a抗原编码基因的克隆和测序 鉴于288a抗原抗体系统为国际首创，相关的生物学特性和功能均未阐明，对 288aAb识别抗原的编码基因进行克隆分析是阐明该抗原抗体系统生物学特性的关键 方面。经胰酶消化后观察抗原抗体反应性的研究结果表明：288aAg为蛋白质抗原， 的编码基因并测定其核苷酸序列。由于288aAb与R丑ji细胞膜抗原有明显的反应性， Isolation System试 浓度和l％琼脂糖凝胶电泳检测核酸质量；将合成的cDNA经T4DNA聚合酶处理末 形成具有5’EcoRI粘性末端和3’HindIII粘性末端的cDNA片段，最后通过凝胶过 噬菌体载体臂连接，经过体外包装，建立Raii细胞cDNA表达文库。通过噬斑分析 4 计算文库容量为6×106，并随机挑取10个噬斑进行PcR分析，其中6个有插入片段， 且片段大小均在500bp以上，符合文库构建要求。初始文库滴度太低，将文库扩增后 经过五轮淘洗使288aAg阳性噬菌体富集达最大量，然后通过噬斑挑取及PcR技术， 成功获得了6个阳性克隆。6个阳性噬斑的cDNA插入片段序列测定后经美国基因库 核酸序列查找(BLAsTn)程序进行同源性搜索，结果发现其中5个插入片断基因 软件将5个插入片段的基因序列转换成的蛋白序列后与Bc094882基因编码的蛋白序 羧基术端第229位～236位己测出的8个氨基酸序列完全不同。此基因在淋巴结生发 中心B细胞中表达，基因