第五章基因工程育种_微生物遗传育种.pptVIP

* 氯化铯梯度离心法： 有效地去除蛋白质、RNA、染色体DNA、受损质粒。 * 二、l噬菌体克隆载体 1、优点 遗传学背景十分清楚 载体容量大，~23kb 具有较高的感染效率 2、类型 插入型载体:较小片段DNA的插入（10kb以内）； 取代型载体：较大片段DNA的插入； 重组DNA分子大小为l噬菌体DNA的75～105％；野生型λDNA为 48kb，λ噬菌体的包装上限是 51kb。编码必要基因的DNA区段占28kb，因此λ载体克隆外源DNA的理论极限值应是23kb。 * 插入型载体 * 取代型载体 * 3、 l噬菌体克隆载体的导入 转染：用λ重组体DNA分子直接感染大肠杆菌，使之侵入寄主细胞内。 效率低：未经任何基因操作处理的新鲜制备的λDNA，其典型的转染效率也仅为 105～106噬菌斑/微克λDNA，体外连接的结果，转染效率便下降到了104～103左右。 λDNA的体外包装：在离体条件下，将重组体DNA包入噬菌体等病毒颗粒，形成有感染功能的病毒载体。 * 三、柯斯质粒载体(cosmid vector) 由l噬菌体的粘性末端和质粒构建而成。含有来自质粒的一个复制起点、抗药性标记、一个或多个限制酶单一位点，来自l噬菌体粘性末端的DNA片段（cos位点）。 * 优点 具有l噬菌体的特性，在体外包装后具有噬菌体的高效感染力； 具有质粒DNA的复制方式； 具有克隆大片段外源