26肽蜂毒素与基因变构人白细胞介素2嵌合蛋白原核表达、纯化及活性测定.pdf

618332 y 置鱼盔堂匡堂医亟圭班塞生坚些硷奎 26肽蜂毒素与基因变构人类白细胞介素一2 嵌合蛋白的原核表达、纯化及活性测定 青岛大学医学院二oo一级病原生物学专业 硕士研究生 侯伟 导 师 王斌教授 摘 要 蜂毒素与基因变构的人IL一2在基因水平连接，构建嵌合体蛋白克隆并在原核系统 中高效表达，并进行初步纯化和抗原性检测。②方法：从～名健康男子的扁桃体细 隆，核苷酸测序证实成功后，自行设计含有突变位点的引物，利用重组PCR技术， 用剪接式重叠延伸(splicedoverlap 构IL-2的基因之间导入四个易形成空间结构的氨基酸残基组成的连接肤 粒转化宿主菌DH5 电泳与Western 达嵌合蛋白的重组菌，并得到纯化的融合蛋白和Thrombin酶切后的嵌合蛋白： Western 性。④结论：在原核表达系统中成功表达了嵌合蛋白，纯化后的蛋白有望是一种新 型免疫调节剂，为进一步在真核细胞中表达以及研究制备低毒、高效的新型细胞因 子类免疫调节剂药物奠定基础。 [关键词] 白细胞介素2； 蜂毒素； 原核表达； 纯化 注：本课题为山东省自然科学基金(E99C02) 激育部高等院校骨干教师专项资金重点资助课题 壹釜态堂医堂医亟±硒嚣垒生、业论塞 Prokaryotic and expression，purification immunoactivity offusion ofmelittinandhuman protein mutantinterleukin．2 (Abstract) To theIL一2 modify the88 Objective genebychanging condonto condon and recombinantmelittin-human arginine express mutant inteleukin一2fusion inEscherichiacoli．The protein fusion wasalso protein anddetectedits The purified immunoactivity．Methods gene humaninterleukin一2hasbeenclonedfromPHA—induced humantonsilcell． were usedto theIL-2 Site-specificmutage