HPLC-DPPH法筛选黄芩与赶黄草中抗氧化剂及黄酮类化合物构效与活性研究.pdf

摘 要 自由基导致的氧化反应不但容易引起各种疾病的发生，而且容易 导致食物变质、损害健康、加速衰老。由于其危害性对人们生活、健 康、食品等方面造成了较大影响而被人们广泛关注。所以，抗氧化剂 的添加和应用一直是人们关注的话题，特别是强效、天然无毒的抗氧 化剂，已经成为食品保藏技术和现代保健不可或缺的一部分。因此建 立一种快速、有效的筛选抗氧化剂方法显得尤为重要。目前用于筛选 植物提取物中抗氧化剂的方法虽然不少，但由于操作繁琐、试验条件 苛刻、仪器与试剂昂贵、并且费时费力而难以广泛应用与普及。本文 采用HPLC．DPPH在线筛选法快速筛选中草药提取物中抗氧化剂，并 对其中具有抗氧化活性的化合物进行分离纯化，结合WMS，NMR 等技术进行结构鉴定。本方法最显著的优点就是不用分离纯化就可以 明确知道其提取物中何种化合物具有抗氧化活性，并且此筛选法省时 省力、操作简单易控、结果直观明了、响应快速准确、具有良好的重 现性。 本文主要做了以下工作： 1、建立了检测10种不同产地黄芩药材中黄芩苷含量的高效液相 ，色谱法。实验证明该方法具有样品前处理简单、灵敏度高、重现性良 好等优点，其检测结果可为黄芩的质量控制和药材的优劣提供参考。 在此基础上建立了HPLC．DPPH在线筛选抗氧化剂系统，用于筛选黄 芩提取物中的抗氧化活性成分，同时比较了黄芩根、茎、叶及10种不 同产地黄芩抗氧化活性成分的差异，并对其中抗氧化活性剂进行分离 纯化且结合UV，MS，NMR等图谱对其做了结构鉴定，发现黄芩素、黄 III 芩苷、二氢黄芩苷、汉黄芩素及野黄芩苷具有一定的抗氧化活性。 2、建立了测定赶黄草中槲皮苷、槲皮素、乔松素葡萄糖苷含量 ODSC1 X 200 8色谱柱(4．6 rnln， 的高效液相色谱法。实验采用Spherigel mL／min。 5岬)，乙腈．0．1％磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱，流速1．0 此方法具有较好的精密度、重现性和稳定性。同时运用HPLC．DPPH 在线筛选抗氧化剂系统筛选赶黄草提取物中的抗氧化活性成分，比较 赶黄草不同部位提取物及道地药材四川I古蔺赶黄草与湖南浏阳引种 栽培赶黄草的明显差异，为赶黄草药理作用研究、质量鉴定及真伪鉴 别提供了重要参考依据。 3、运用在线HPLC．DPPH系统研究黄酮类化合物结构与抗氧化 活性能力的影响机制与规律，比较了不同环上羟基的位置、个数及有 无糖苷取代对抗氧化能力大小的影响。该研究对指导我们选择抗氧化 剂作为食品添加剂具有重要参考价值；并在分离纯化抗氧化剂时、优 先从含量较高中草药中提取抗氧化剂指明了方向；亦为黄酮类化合物 的分子修饰和抗氧化剂的人工合成提供了重要的依据，让天然抗氧化 剂保健品、药品、食品添加剂的应用前景越来越广泛。 关键词：抗氧化剂、黄芩、赶黄草、HPLC．DPPH、黄酮 IV ABSTRACT Freeradicalformed oxidation invarious during processesoccurring was and oxidationcausedfreeradicals productslivingorganisms．The by not relatedwiththeoccurrence