辅酶Q-%2c10-结构及其与生物膜分子相互作用研究.pdfVIP

辅酶Q。o的结构及其与生物膜分子的 相互作用研究 专业生物物理学 研究生杨小乐 指导教师孙润广教授 摘要：辅酶Qlo广泛存在于各种组织细胞尤其是心肌细胞中的线粒体中，是组织细 胞内具有重要作用的活性酶，在细胞线粒体呼吸链即电子传递系统中起递氢体作 用，是细胞呼吸链的重要组成部分，参与ATP的合成。它也是一种公认的氧自由 基清除剂，其异常的代谢与人体的许多疾病相关联，人为的补充辅酶Olo能减缓许 多病症。辅酶O。o的结构与其功能有关，但是对辅酶Qlo的结构与功能的关系、溶 液构像等方面的研究报道尚不多见。因此，在分子水平上探寻辅酶Q10的结构定会 对揭示线粒体疾病病理起重要作用。 本论文在前人研究的基础上，利用LB膜技术和原子力显微镜技术，以猪心肌 线粒体为材料，运用醇碱皂化法从动物组织中提取辅酶Q10’运用多种物理手段进 行鉴定，然后将其装配到模拟生物膜中，用LB膜技术研究其与生物膜的相互作用， 同时用原子力显微镜技术(—廿M)探测其在溶液中的构象、模拟生物膜的结构进 而确定其在生物膜中的位置。从辅酶Q10与模拟生物膜的相互作用以及在溶液中构 象入手，有可能为辅酶Qlo在生物膜中的位置、生物利用度等热点问题提供线索。 目前通过实验研究，取得如下研究结果： 1．本研究发现皂化时间在30rain，皂化温度在9矿C时辅酶010产量最高。在 纸层析提纯实验中，以苯：乙醇(1：2)作展开剂时，Rf值和斑点直径均适宜， 可以得到很好的分离效果。 HauB 2．PC(PE)分子膜中加入辅酶Qlo后，相变均出现了延缓。这就为Thomas 等的结论提供了证据。即辅酶Q。o并没有位于分子膜内，而是位于疏水区，同时碳 氢链伸入膜层当中，有可能起到抑制质子漏的作用，维持一定的梯度。PC(PE)分 子膜中先加入胆固醇，可以很明显的看到第二次相变较原来更加明显。接着加入 辅酶Qlo，我们看到膜压迅速增大，相变趋于平缓。同时我们可看到辅酶0lo对PC 的影响比对PE的影响更具有规律性。而先加入辅酶Qlo，再加入胆固醇，同样我 们可以看到膜压迅速增大，并且PC分子膜膜质较PE分子膜膜质更为稳定，这可 能与分子的形状有一定的关系。 3．制得的辅酶Q¨精品通过原子力显微技术在分子水平上观测其结构。我们 可推测辅酶Qlo分子呈链状。随着辅酶Qlo一乙醚溶液的稀释，辅酶Q10在云母表 面呈现6类拓扑结构。其在云母表面较容易形成片状多孔区域。 均呈岛屿状。GMl与辅酶Qlo作用后平整度较低，GM2、GM3与辅酶Q10作用后 较为平整，但其中有数个孔状。(2)一般情况下胆固醇对细胞膜起稳定作用，可是 以上研究成果为辅酶Qlo在生物膜中的方位、作用，溶液构象及在体内的生 物利用度等问题的研究提供了重要的资料，对丰富和进一步发展辅酶Q10结构与功 能等有重要意义，同时也为辅酶Q10的应用积累了资料。 关键词：CoQlo，AFM，LB，溶液构像，相互作用，脂质体 Ⅱ and Interaction The of Structurethe CoQl0 Study and between biomembranemolecules CoQl0 Major：Biophysics Xiao-leAdvisor：SUN Postgraduate：YANG Run-guang Q10 existsineachkindof in in widely histiocyteparticular Abstrac