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- 2016-09-15 发布于浙江
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(2)基因表达载体的构建步骤。 3.基因导入受体细胞方法 生物种类 常用方法 受体细胞 转化过程 植物细胞 农杆菌转化法 体细胞 将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA→表达 动物细胞 显微注射法 受精卵 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 微生物细胞 Ca2+处理法 原核细胞 Ca2+处理细胞→感受态细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 4.目的基因的检测与鉴定 类型 分子 水平 检测 个体水平鉴定 步骤 第一步 第二步 第三步 包括抗虫或抗病的接种实验,以确定是否有抗性以及抗性程度;基因工程产品与天然产品进行活性比较,以确定功能是否相同等 检测内容 目的基因是否插入受体细胞染色体的DNA上 目的基因是否转录出mRNA 目的基因是否翻译出蛋白质 方法 DNA分子杂交技术(DNA和DNA之间) 核酸分子杂交技术(DNA和mRNA之间杂交) 蛋白质分子杂交(抗原—抗体之间杂交) 结果显示 是否成功显示出杂交带 同上 同上 [特别提醒] (1)原核生物作为受体细胞的优点:繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少。 (2)基因工程四步曲中,只有第3步“将目的基因导入受体细胞”没有发生碱基互补配对,其他三步中都涉及碱基互补配对,具体过程如下: ①第1步中
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