Avastin对兔眼小梁切除术后滤过泡血管内皮生长因子(VEGF)和转化生长因子(TGF-β2)抑制作用的实验的研究.pdf

删…＼I燃剃3㈣5骶 皮生长因子(ⅦGF)和转化生长因子 (TGF．132)抑制作用的实验研究 硕士研究生：叶倩 指导教师：周和政教授 摘要 青光眼小梁切除术是目前临床最常用的抗青光眼手术方式，滤过泡瘢痕化 则导致手术造成的新房水通道受阻，眼压升高，是小梁切除术失败的主要原因【l】。 随着分子生物学等相关科学技术的发展，对瘢痕形成过程中细胞因子的研究越 来越深入，从分子水平来研究、寻找高效低毒的抗纤维化药物，可能是提高青 光眼滤过手术成功率的有效途径。 手术造成的组织创伤引发含新生血管、成纤维细胞及纤维组织的肉芽组织 修复，其中新生血管生成是修复过程中重要的环节之一，从创伤早期炎症反应、 肉芽组织的形成到机体组织的重建和瘢痕形成都离不开血管细胞的参与。血管 内皮生长因子(VEGF)是血管生成过程中最重要的正向调控因子，在肿瘤生长 及转移、创伤愈合和增生性瘢痕、瘢痕疙瘩等病理过程中可过量表达【2】。VEGF 在青光眼术后滤过瘢痕形成过程中的重要作用被动物和临床实验所证实，但目前 有关青光眼术后滤过泡瘢痕形成过程中VEGF动态变化的相关研究鲜有报道。本 实验通过双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫组织化学染色方法，明确 VEGF在小梁切除术后滤过泡组织中的动态表达情况，旨在从分子水平进一步探 讨瘢痕化发生机制，扩展治疗思路。 摘要 虽然VEGF是目前最强的新生血管因子，但仅考虑VEGF的促血管生成作用 还不足以完全解释其促瘢痕化作用，TGF．p已经被证实是目前在机体创伤修复进 程中起到最关键调控作用的细胞因子【3J，体外研究发现，TGF．p可以刺激VEGF 的表达，进而促进血管形成【4】。由此推测二者在小梁切除术后滤过泡瘢痕化的发 生发展中可能存在一定的相互作用关系，本实验通过观察VEGF与TGF．f12在小梁 切除术后滤过泡组织中的动态表达情况，探讨二者在滤过泡瘢痕形成过程中的 相互作用关系，为提前预防滤过泡瘢痕化，提高手术成功率提供理论依据。 而抑制VEGF的生物学活性而起作用【5J，已有报道其在抑制滤过泡纤维化中有显 著作用和优越性，但作用的具体机制仍未明确，其注射时机、给药剂量、给药 次数等仍缺乏临床规范。本实验通过观察不同浓度的AvaStin对兔小梁切除术后 滤过泡瘢痕化的抑制作用及对滤过泡组织中VEGF和TGF．p2的影响，初步探讨 Avastin的作用机制，为抑制滤过泡瘢痕化提供理论基础，有利于制定完善的临 床用药规范。 第一部分VEGF和TGF．胆在兔眼青光眼小梁切除术后滤过泡的表达 【目的】以青紫蓝兔为动物模型，观察VEGF在兔眼小梁切除术后滤过泡瘢痕 形成过程中的动态表达，探讨VEGF在的兔眼小梁切除术后滤过泡瘢痕形成过 程中的作用及与TGF．f12的相关性。 【方法】28只青紫蓝兔随机分为7组，随机选取1眼行小梁切除术，另l眼术 作为对照，于术前和术后l，3，5，7，14，21d观察滤过泡瘢痕化情况，通过 常规HE染色显示兔眼小梁切除术后滤过泡形态变化，免疫组织化学方法显示滤 过泡组织中VEGF及TGF．B2的表达，采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA) 测量滤过泡组织中VEGF及TGF-B2的含量。采用两个重复测量因素的方差分析 比较实验组与对照组、不同时间VEGF及TGF-B2的含量的差异，并应用Pearson 相关分析比较VEGF及TGF_B2的相关性。 【结果】术后实验组中VEGF含量随手术后时间变化明显呈峰值改变，术后第1 lI 硕士学位论文 天含量即增加，术后第5天到达峰值，随后逐渐下降。对照组与实验组比较， VEGF含量差别具有统计学意义(P=0．000)，不同时间点差别具有统计学意义 (P：0．ooo)。术后实验组中TGF-B2随手术后时间变化明显呈峰值改变，术后 第1天即明显增加，术后第7天到达峰值，以后含量仍呈升高趋势至21d。与相 应对照组比较，实验组差别具有统计学意义(P=-0．012)。不同时间点差别具有 统计学意义(P=-0．ooo)。术后滤过泡组织VEGF和TGF_B2含量具有相关性 (Pearson相关系数为0．885，P=-0．01