COMT在木犀草素处置中的作用及其甲基化代谢区域选择性的研究.pdf

COMT在木犀草素处置中的作用及甲基化代谢区域选择性研究 浙江大学药学院：药物分析学 2009级博士研究生：陈忠坚 导 师：蒋惠娣教授 曾 苏教授 摘 要 在体内代谢多种儿茶酚类神经递质和激素(如多巴胺、肾上腺素、去甲肾上腺素、 2．羟基雌二醇、4．羟基雌二醇等)。自1958年首次报道COMT参与代谢多巴胺以 来，COMT在神经学科和精神学科中受到广泛关注，研究结果显示coMT在精神 功能方面具有重要的调节作用。cOMT抑制剂可以有效增加左旋多巴的体内暴露 量从而辅助治疗帕金森病，因此，寻找新型cOMT抑制剂一直是帕金森病研究中 一个热点。在药物代谢领域，cOMT属于一个二相药物代谢酶，将一个甲基基团 移到底物的邻二酚羟基上，该甲基化代谢对底物的药物代谢动力学和药效学将产 生较大的影响。 黄酮化合物是自然界中分布最为广泛的植物多酚，研究显示其具有多种药理 活性，如抗肿瘤、抗氧化、抗炎等，流行病学研究提示，饮食中黄酮的摄入量与 癌风险的降低存在一定的相关性。目前，一些黄酮化合物或含有黄酮的植物提取 物被广泛应用到临床药物和功能食品开发中。由于黄酮的酚羟基结构，一般认为 子结构中存在邻二酚羟基结构，其可以被coMT识别发生甲基化代谢，而甲基化 后的黄酮仍具有药理活性，因此，研究c0MT介导的邻二酚羟基黄酮的甲基化代 谢，有助于阐明该类黄酮的体内过程及作用机制。本文主要研究COMT介导的菊 内外甲基化代谢，以及甲基化代谢在木犀草素处置中的作用。 第一章大鼠口服菊花提取物后木犀草素和芹菜素药动学差异研究 morifoli啪 背景和目的：前期研究大鼠口服菊花提取物(ClⅡysaJltllemum apigenin)分子结构相似(后者B环中少一个羟基)，且两者在CME中含量接近， 但是当大鼠口服CME后，血浆中木犀草素浓度显著低于芹菜素，木犀草素AUCo。 约为芹菜素的10％。根据文献报道及课题组原有研究结果(微粒体代谢、肠道水 解、大鼠组织分布和排泄等)均不能解释两者巨大的血浆暴露量差异。本章主要 从吸收和代谢两方面研究探讨木犀草素暴露量显著低于芹菜素的可能机制。 方法：大鼠空肠单向灌流模型和绝对生物利用度模型评价大鼠肠道对木犀草 素和芹菜素的吸收差异；大鼠肝微粒体一相代谢体系、大鼠肝、肾、肺、小肠组 织s9孵育体系、大鼠原代肝细胞模型评价木犀草素和芹菜素的代谢稳定性差异。 min。1 结果：大鼠空肠单向灌流结果显示，木犀草素的肠道通透性参数(毛，7．96 和只fr，4．87c删hin)仅为芹菜素(屯，18．5min．1和Pefr，10．8cm，min)的50％左右； 大鼠口服CME后，木犀草素的绝对生物利用度(30．4％)显著低于芹菜素(51．1％)。 大鼠肝微粒体一相代谢体系中，芹菜素代谢消除显著快于木犀草素，而大鼠组织 s9和原代肝细胞代谢模型上，木犀草素代谢消除显著快于芹菜素，且在水解后的 木犀草素孵育样品中检测到一个未知甲基化代谢产物M。 结论：肠道吸收和各组织代谢是大鼠口服CME后，造成木犀草素血浆暴露量 显著低于芹菜素的两个重要原因，木犀草素的未知甲基化代谢M可能与木犀草素在 大鼠体内快速消除密切相关。 第二章大鼠coMT介导的木犀草素甲基化代谢研究 背景和目的：推测木犀草素的未知甲基化代谢M可能与木犀草素在大鼠体内 III 快速消除有关，因此有必要深入研究该代谢物结构及其代谢途径。因此，本章首 先鉴定甲基化代谢物结构及介导其甲基化代谢的酶，并评价该代谢酶在木犀草素 体内处置中的作用。 方法：1)代谢物鉴定：大鼠静脉给予6．5 mg／l(g木犀草素前后，分别收集尿 液，样品经水解处理后，卸PLc分析，寻找代谢产峰，并与代谢物对照品比对紫外