CGRP和NGF对全脑缺血再灌注大鼠脑组织的保护作用机制.pdfVIP

摘 要 mRNA／ mRNA／c—Fos蛋白、c—jun 全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c—los c—Jun蛋自、Caspase一3蛋白表达的影响。 方法：在微动脉夹夹闭两侧颈总动脉制作的大鼠短暂性全脑缺血再灌 注模型上，应用原位杂交方法和显微图象分析方法检测全脑缺血后再灌注 mRNA表达，应用免疫组织化学方法和 大鼠纹皮质c—losmRNA、c—jurl 显微图象分析方法检测全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c—Fos蛋白、c— Jun蛋白、Caspase一3蛋自表达。 1．实验动物分组 采用健康雄性sD大鼠，体重300—3509，实验动物由中国医科大学实 rain 验动物中心提供。随机分组为(1)假手术组(2)缺血组：全脑缺血30 后给予0．9％生理盐水l mI，3h后取材。(4)NGF组：全脑 组：全脑缺血30min后给予CGRPl“g／1 u／1 缺血30rain后给予NGFl000 rain后给予NGFl000 ml，分别在3h、1d、3d不同时 缺血30 u+CGRPl肛g／1 间段取材。每组动物各6只。 2．微动脉夹夹闭两侧颈总动脉制作大鼠全脑缺血后再灌注模型 大鼠水合氯醛腹腔麻醉(350mg／kg体重)，取颈部正中切口，钝性分离 左、右颈总动脉及右颈外动脉，用微动脉夹夹闭两侧颈总动脉30rain，并从 右颈外动脉近心端插入套管针至颈内动脉与颈外动脉的分叉处备用。30 rain后去除两侧颈总动脉上的微动脉夹开始再灌注并经套管向颈总动脉内 注射药物，30 rain内注射完后拔出套管并结扎右颈外动脉。假手术组不夹 闭左右颈总动脉，不注射药物，其它同上。 原位杂交检测各组动物3h后取材。麻醉后开胸经左心室插管至升主 流固定，立即开颅取脑取两耳极连线前3mm左右的冠状切面组织块(含纹 皮质)，4％多聚甲醛(含有1／1000DEPC)室温固定l h，蒸馏水充分洗涤， 30％蔗糖液4E过夜沉底后，冠状切面冰冻切片，厚16 I．zm，4E冰箱保存备 用。 免疫组织化学检测各组动物分别在3h、ld、3d不同时间段取材。麻醉 之后开胸经左心室插管至升主动脉，肝素生理盐水冲洗血液后，用4％多聚 甲醛灌流固定，开颅取脑取两耳极连线前3mm左右的冠状切面组织块(含 h，30％蔗糖液4℃过夜沉底后，冠状切面冰 纹皮质)，4％多聚甲醛固定24 冻切片，厚12“m，4℃冰箱保存备用。 结 果 1．e—los mRNA原位杂交检测结果： 假手术组阳性反应非常弱，缺血组阳性反应强于假手术组(P0．01)， 阳性细胞数量多且多呈圆形、椭圆形，胞桨内可见浓染的棕褐色颗粒阳性反 NGFCGRP组与缺血组比较阳性细胞数量明显少，阳性反应明显弱(P0． 2．c—Fos蛋白的免疫组织化学检测结果： 假手术组大鼠纹皮质未见c—Fos蛋白表达。缺血组较假手术组大鼠 灌注3h时强，ld、3d时弱。 3．C—junmRNA原位杂交检测结果： 假手术组阳性反应非常弱，缺血组阳性反应强于假手术组(P0．01)， 阳性细胞数量多且多呈圆形、椭圆形，胞桨内可见浓染的棕褐色颗粒阳性反 NGFCGRP组与缺血组比较阳性细胞数量明显少，阳性反应明显弱(P0． 4．c—Jun蛋白的免疫组织化学检测结果： 假手术组大鼠纹皮质未见c—Jun蛋白表达。缺血组较假手术组大鼠