Ad-HO-1腺病毒载体构建与对大鼠移植肝的保护作用.pdfVIP

Ad—H沪l腺病毒载体的构建及其对大鼠移植肝的保护作用 Ad-Ho-1腺病毒载体的构建及其对大鼠移植肝的保护作用 摘 要 背景： 缺血再灌注损伤目前在肝移植中是不可避免地发生，并且可能导致移植肝出现原 发性无功能，这也是临床中需要再移植的重要原因之一，因此重视对缺血再灌注损伤 的研究有助于解决目前临床中供体紧缺的矛盾。而基因治疗是近年来迅速开展的临床 治疗方法之一，利用基因转染技术来减缓移植肝的缺血再灌注损伤有着良好的临床应 用前景。 第一部分：大鼠原位肝移植模型的建立 目的：用改良二袖套法建立稳定的大鼠原位肝脏移植模型。 方法：在Kamada二袖套法的的基础上，对大鼠原位肝移植术在取肝、灌注、修 肝和植肝等手术操作以及围手术期的处理进行改良，复制120例次大鼠原位肝移植模 型。观察供、受手术时间、无肝期、手术成功率、术后并发症和一周存活率。 结果：与训练初期相比较，训练的后期在手术时间、无肝期、手术成功率、术后 并发症和移植后大鼠一周存活率均存在显著差异。 结论：通过在Kamada二袖套法的基础上进行技术改进和一定数量的模型训练能 够建立理想的大鼠原位肝移植模型。 第二部分：携带hHO-1基因的重组腺病毒载体的构建 目的：构建含有血红素氧合酶．1基因的重组腺病毒载体 Ad—Ho-l腺病毒载体的构建及其对大鼠移植肝的保护作用 摘要 并用Ad—HO．1感染体外培养的细胞，观察其感染效率。 有效感染体外培养细胞使之表达hHO．1基因的产物。 结论：采用Cre／LoxP腺病毒重组系统能有效地构建有良好安全性的携带lmO— l基因的腺病毒载体。 第三部分Ad_Ho_l对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护作用 目的：利用携带hHO．1基因的腺病毒载体研究其对大鼠移植肝缺血再灌损伤的 保护作用。 空载体进行腹腔注射，实验组供体用Ad．HO．1进行腹腔注射。36小时后取肝行ROLT。 缺血再灌注6小时后处死模型，采血送检肝功能；流式细胞仪测肝细胞凋亡率； easpase．31电镜观察肝细胞的超微病理变化。 照组。(3)免疫组化发现HO．1在实验组中大量表达且主要在血管区，而对照组中 U Ad-H0-l腺病毒载体的构建及其对大鼠移植肝的保护作用 摘要 性细胞出现于肝间质细胞。(4)电镜观察对照组可见典型细胞凋亡，而实验组肝细胞 超微结构基本正常。 结论：(1)构建携带hHO．1基因的腺病毒载体通过热转染能成功地转入供肝中 并高效表达，且主要表达在血管区域。(2)HO．1在供肝的缺血再灌注损伤中对肝脏 有显著的抗凋亡和抗炎的保护作用；并且抗凋亡作用与上调Bcl．2、Bcl．xl和下调 easpase．3有关，而抗炎作用则可能与抑制巨噬细胞浸润和减少TNF．a的表达有关。 关键词：肝移植缺血再灌注损伤血红素氧合酶．1腺病毒载体大鼠 作 者：胡明政 指导教N-钱海鑫 ⅡI HumanHeme Adenovirusof ofRecombinant Construction ROLT toGraftsafter anditsProtection Gene Oxygenase-I Abstract Background：