表达F4%2bETEC靶向性乳酸杆菌活菌载体构建与免疫原性分析.pdf

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目 录 摘要…………………………………………………………………………………………………………………………………..I 英文摘要…………………………………………………………………………………………。III 1前言………………………………………………………………………………………………1 1.1仔猪腹泻的流行与危害…………………………………………………………………….1 1.2ETEC与仔猪腹泻……………………………………………………………………………2 1.2.1 ETEC的致病机制………………………………………………………………………2 1.2.2菌毛黏附素……………………………………………………………………………一2 1.2.3肠毒素…………………………………………………………………………………..3 1.3用于防控F4+ETEC引起的仔猪腹泻疫苗研究现状………………………………………4 1.4M细胞靶向性疫苗研究进展………………………………………………………………..6 1.5乳酸杆菌调控肠道健康…………………………………………………….:………………7 1.6乳酸杆菌活载体表达ETEC抗原研究进展………………………………………………..8 1.7研究目的和意义…………………………………………………………………………….9 2材料与方法……………………………………………………………………………………..10 2.1材料………………………………………………………………………………………………………………………10 2.1.1菌种和质粒…………………………………………………………………………….10 2.1.2实验动物………………………………………………………………………………..10 2.1.3引物………………………………………………………………………………………………………………一10 2.1.4主要试剂………………………………………………………………………………11 2.1.5主要实验仪器与设备………………………………………....………………………11 2.2试验方法……………………………………………………………………………………11 大肠杆菌的构建……………………………………………………………………………~11 2.2.2重组大肠杆菌的诱导表达及鉴定……………………………………………………22 2.2.3重组蛋白免疫学指标的测定…………………………………………………………22 2.2.4重组干酪乳杆菌的构建、诱导表达与鉴定…………………………………………一23 2.2.5重组乳酸菌一次免疫效果评价………………………………………………………25 2.2.6重组乳酸菌三次免疫效果评价………………………………………………………27 2.2.7重组乳酸菌免疫哺乳期小鼠免疫效果评价…………………………………………28 3结果…………………………………………………………………………………………………………………………….30 3.1目的基因FaeG的PCR扩增结果…………………………………………………………30 3.2目的基因FaeG-c01的PCR扩增结果……………………………………………………30 l 3.3目的基因STa-LTB的PCR扩增结果…………………………………………………….3 l 3.4目的基因STb的PCR扩增结果…………………………………………………………..3 1 3.5目的基因STa-LTB.STb的PCR扩增结果……………………………………………….3 东北农业大学农学硕士学位论文 3.6重组表达载体的鉴定………………………………………………………………………32 3.6.1大肠杆菌重组表达载体pET-30b.FaeG的鉴定结果…………………………………32

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