表达细胞因子和H5亚型禽流感病毒HA基因重组鸡痘病毒构建及细胞因子免疫佐剂作用.pdfVIP

云水丽： 重组鸡痘病毒的构建及细胞因子的免疫佐剂作用 ! 表达细胞因子和H5亚型禽流感病毒HA基因重组鸡痘 病毒的构建及细胞因子的免疫佐剂作用 硕士生：云水丽 导师：彭大新教授 刘秀梵教授 摘要 疫苗的免疫接种在禽流感(A啊趾砌嘲m)的控制中起着极为重要的作 用，但现有的常规灭活疫苗存在成本高及干扰临床检测等缺陷，开发新型疫苗势 创Ⅳ)保护性抗原基因研制基因工程疫苗已发展到相当成熟的程度，但现有的重 组鸡痘疫苗都存在着易受母源抗体干扰、免疫保护效果不如灭活疫苗的问题，以 细胞因子作为免疫佐剂可能是增加疫苗保护力的有效途径之一。因此，我们利用 表达』州HA基因和IL．6基因的四种重组鸡痘病毒，并对细胞因子的免疫佐剂作 用进行评估，主要内容如下： 1．表达H5亚型AⅣHA基因和IL．2基因的重组鸡痘病毒的构建 以鸡痘病毒为载体，将鸡IL．2基因插入到鸡痘病毒表达载体p12LS启动子 HA基因和鸡IL．2基因的重组鸡痘 PE，L下游，使两基因反向串联，构建携带舡V 鸡痘病毒、似FPVLP的鸡胚成纤维细胞(CEF)中，经蓝斑筛选获得纯化的重组鸡痘 扬州大学硕士论文 Ⅱ 一 表达。 2．表达创ⅣHA基因和鸡也．6基因的重组鸡痘病毒的构建 根据NCBI发表的鸡IL．6基因序列，人工合成和拼接获得几-6基因。构建重 粒转染至已感染鸡痘病毒、¨．FPVLP的鸡胚成纤维细胞(CEF)中，经蓝斑筛选获得 痘病毒能够表达H5亚型√州HA；RT-pCR证实了卧6在重组鸡痘病毒中的表达。 3．重组病毒的免疫效力试验 7日龄白来航SPF雏鸡随机分组，分别于颈部皮下免疫册V．HA、 株进行滴鼻攻毒，攻毒后3d采集喉头棉拭子，用10日龄非免疫鸡胚分离病毒。 为10．5％，是所有免疫组中排毒率最低的。 7日龄商品蛋鸡随机分组，免疫、抗体监测、攻毒、棉拭子采集及病毒分离 d rFPV．AIH5甜L2组检测到HI抗体，免疫后2l 为36．4％，也是所有免疫组中排毒率最低的。 综上所述，本研究共构建4种重组鸡痘病毒，免疫效力试验显示重组鸡痘病 体的商品蛋鸡上，重组病毒也具有较好的保护效力。研究结果表明IL．2在共表达 云水丽： 重组鸡痘病毒的构建及细胞因子的免疫佐剂作用 堕 重组鸡痘病毒免疫保护中起到了免疫佐剂的作用，这为研制新型的禽流感重组鸡 痘病毒疫苗奠定了基础。 关键词：禽流感病毒：血凝素基因；鸡白细胞介素2；鸡白细胞介素6：重组鸡 痘病毒；佐剂 扬州大学硕士论文 ConstmctionofI沁combinamVirus Fowlpox andHA of co。eXpresslngcytokine H5 genes gene subb厂pe ■ ● ^ ● ● ●，’^． ，’ ● ● aVlan lnnUenZaV1mSandlmmUnee士士eCtOt aS CVtOKlne