大鼠下肢伸直襁褓动物模型建立及该体位对髋臼发育影响实验及研究.pdf

·中文结构式摘要· 大鼠下肢伸直襁褓动物模型的建立及该体位对 髋臼发育影响的实验研究 刖 吾 ofthe 发育性髋关节发育不良(developmental DDH)是小儿外科 dysplasiahip 常见的疾病，严重影响儿童生活质量，发病率约为1．1—3．8‰。它包括髋臼发育 不良、髋关节半脱位和完全脱位三种病理类型，但目前DDH的真正病因不清楚，认 为有两个主要危险因素：遗传因素和机械因素。 流行病学研究表明习惯背背婴儿的民族，如朝鲜、香港和非洲一些国家发育 性髋关节发育不良发病率非常低。相反，位于寒冷地区习惯双下肢捆绑式襁褓的 一些民族，如意大利北部，加拿大、北美印第安人等DDH发病率明显增高【121。 因此很多学者认为双下肢伸直襁褓体位是髋关节发育不良的危险因素，并推断人 类生后髋关节伸直内收体位会导致髋关节发育不刚31。生后将婴儿双下肢并拢伸 直包裹是常见的襁褓方式，双下肢伸直襁褓时，髋关节固定不动，处于失动态，头 更加重视髋臼及股骨头间相互的机械应力刺激，髋臼的最终形状和其深度很大程 度上依赖于头臼的相互作用。正常状态下的髋臼与股骨头相互间在各个方向上的 生理性力学载荷保证了二者的正常发育，最终形成一个良好匹配的髋关节。 但既往国内外文献未见模拟生后双下肢伸直襁褓体位动物模型实验研究的相 关报道。本实验通过建立生后双下肢伸直襁褓体位动物模型及对实验动物大体标 本与x线的观察，证实下肢伸直襁褓体位对幼鼠髋臼发育的不良影响；并从分子 水平揭示下肢伸直襁褓体位对幼鼠髋臼软骨复合体不同区域骺板软骨细胞增殖、 成熟、凋亡的影响，从动物实验方面证实双下肢伸直襁褓体位是发育性髋关节发 育不良的主要病因之一。 材料与方法 一、实验材料 Wistar新生幼鼠，由中国医科大学附属盛京医院动物部提供。 二、实验方法 (一)幼鼠下肢伸直襁褓体位动物模型制作及该体位实验动物髋 臼的大体与X线观察，及病理学变化 1、下肢伸直襁褓动物模型制作 将60只新生Wistar幼鼠用医用胶带将双小腿、双髋关节缠绕固定10日，保 持髋关节伸直内收位，模拟双下肢伸直襁褓体位，作为组一；另将61只新生幼鼠 伸髋、屈膝位医用胶带固定双小腿于双髋关节，制作胭绳肌完全松弛动物模型， 作为组--；组一、二为实验组。另60只新生幼鼠双下肢不予处置，为组三，作为 对照组。 2、动物髋臼大体与X线观察，及番红O一快绿染色观察病理学变 化 分别于大鼠生后lOd末、8w末处死实验动物。lOd处死之大鼠处死前lh腹腔 绿染色。8w末处死之大鼠，通过大体标本及X线摄片，观察髋臼变化。 (二)免疫组化显示髋臼软骨复合体软骨细胞中VEGF、X型胶原 及Runx2的改变，观察双下肢伸直襁褓体位对髋臼软骨复合体软骨细 胞成熟变化。 (三)溴2一脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)示踪有丝分裂期软骨细胞，观 察双下肢伸直襁褓体位下骺板软骨细胞的增殖；应用TUNEL法检测双 下肢伸直襁褓体位下骺板软骨细胞的凋亡。 2 复士 里 ：口 木 一、双下肢伸直襁褓体位动物模型及大体、X线、病理观察结果 下肢伸直襁褓体位动物模型制作成功，实验组髋臼较对照组髋臼外形发生明 显改变，实验组髋臼指数及髂骨坐骨夹角明显增大(胙o．01)，髋关节脱位率、DDH 发生率明显增高(萨0．01)，番红O一快绿染色可见实验组髋臼软骨较对照组宽 (亦o．01)。 二、双下肢伸直襁褓体位下大鼠髋臼软骨细胞VEGF、X型胶原及 Runx2的表达结果 实验组VEGF、X型胶原与Runx2主要阳性表达于髋臼软骨复合体的髂骨、 坐骨、耻骨各支肥大区，但较对照组低(庐0．01)。实验组髋臼关节软骨髂骨支肥 大区VEGF、X型胶原与Runx2阳性表达较坐骨支、耻骨支低∞0．01)。 三、双下肢伸直襁褓体位下Brdu示踪S期大鼠髋臼软骨细胞及大 鼠软