电针内关、神门、合谷对心肌肥厚模型大鼠ERK通路影响比较及研究.pdf

摘要 目前，临床研究证实针灸能有效改善心肌肥厚患者的心功能，实 验研究从针刺对缺血心肌功能的调整、心肌细胞结构及血管活性物质 的改变、能量代谢障碍的调节、氧自由基生成的减少、抗心肌缺血的 中枢神经机制及分子生物学机制等多方面进行了探讨，普遍认为针刺 能够积极有效保护心肌细胞。但未见从细胞外信号调节激酶ERK研 究电针不同经脉(穴)治疗心肌肥厚的相关报道。本实验试图从与心 相关的内关穴及与心无直接联系但处于同一解剖水平段的神门、合谷 穴对心肌肥大损伤调整作用予以对比研究。 目的： 本课题拟在中医针灸“胸胁内关谋临床经验的指导下，借鉴针灸 治未病的学术特点，从细胞、分子水平研究针刺对心肌肥厚模型大鼠 心肌组织病理形态结构、心电活动、神经内分泌系统CA类神经递质 II和ET、ERK信号通路的调节机制，并比较心经、心包经、 以及Ang 大肠经上处于同一解剖水平段的神门、内关、合谷三组穴位间的疗效， 为经脉(穴)．脏腑相关提供实验依据。 方法： 字表法分为7组：正常组，模型组，神门组，内关组，合谷组，抑制 剂组，内关+抑制剂组，每组15只。采用经典的皮下注射盐酸异丙肾 上腺素制备大鼠左心室心肌肥厚模型，电针内关、神门、合谷穴进行 比较。针刺操作方法：造模同时分别针刺大鼠双侧上述3穴，大鼠穿 0．30mmx 自制鼠衣，用o 15mm毫针直刺穿皮达筋间，捻转lmin后， 接HANS．200型电针治疗仪，左右各接一电极，连续波，频率2Hz， 剂量腹腔注射进行干预。所有大鼠实验结束后称取体重，待心电图观 察结束后取材：心内采血取血浆，然后摘取心脏分离左心室称重，计 算心肌肥厚指数。取左心室游离壁中部心室肌，显微镜下观察心肌细 胞病理结构；I-IPLC检测血浆中儿茶酚胺类递质及代谢产物含量；放 射免疫法检测心肌组织AngII、ET含量；免疫印迹法检测左心室 ERKl／2、P．ERK蛋白的表达，并对数据进行统计分析。 结果： 1．针刺对大鼠心肌组织病理结构的影响：正常大鼠心肌纤维排 列整齐，毛细血管丰富，内皮细胞未见水肿；心肌细胞形态完整，细 胞核电子密度均匀，核仁完整，细胞凋亡较少见；肌丝及肌小节结构 清晰可见，线粒体丰富，结构完好，胞质内细胞器结构清晰可见，未 见水肿及空泡变。造模后，大鼠心肌细胞光学显微镜下主要表现为以 下三个方面：心肌纤维排列紊乱，心肌间质增生，心肌间质纤维化； 透射电镜下主要表现为以下六个方面：线粒体肿胀、细胞凋亡增多、 内皮细胞间质增生、肌浆网扩张、收缩带收缩不同步、闰盘变形。其 余5组大鼠在上述六方面均有不同程度的改善； 2．针刺对大鼠心电图的影响：实验观察到，大鼠造模后心电图 ST段，R-R间期于造模14d后明显升高，而心率明显降低，与正常 O．01)；抑制剂干预及电针治疗后，大鼠心率、心电图ST段及R-R 间期趋于正常，与模型组比较，有显著性差异(Po．05)，其余各 组间比较无显著性差异(PO．05)； 3．针刺对大鼠心肌肥厚指数的影响：大鼠造模后心脏质量明显 增加，与正常组相比，有极显著性差异(Po．01)，其余各组间比 较无显著性差异(PO．05)；大鼠全心质量指数和左心室质量指数 于造模14d后明显升高，与正常组比较，有极显著性差异(PO．01)； 抑制剂干预及电针治疗后，大鼠全心质量指数和左心室质量指数明显 降低，与模型组比较，有显著性差异(PO．05)，三组穴位相比尤 4．针剌对大鼠血浆中儿茶酚胺类神经递质的影响：大鼠血浆中 Ⅱ 儿茶酚胺类神经递质(NE、E、DA；肾上腺素、去甲肾上腺素、多 二醇、高香草酸、3,4．二羟基苯乙酸)含量于造模14d后明显升高， 与正常组比较，有显著性差异(P0．05)；抑制剂干预及电针治疗 后，大鼠儿茶酚胺类神经递质及其代谢产物含量减少，与模型组比较， II和ET的影响：大鼠心肌组织中 5．针刺对大鼠心肌组织中Ang AngII和ET含量于造模14d后明显升高，-9正常组比较，有显著性 II 差异(P0．05)；抑制剂干预及电针治疗后，大