bFGF在恒牙牙根发育不同阶段的牙髓中表达的免疫组化的分析.pdfVIP

中文摘要 前 言 在牙齿发育期间，牙乳头间充质细胞分化为成牙本质细胞，形 成原发性牙本质；在牙齿萌出后，无论年轻恒牙，还是成熟恒牙， 受损伤后均有修复性牙本质的形成，表明牙髓中存在有分化潜力 ceUs)，后期可能分化为成牙本质细胞样细 的祖细胞群(progenitor 胞(odontoblast—likecells)。目前认为一些生长因子可能参与调 节牙髓组织中的细胞增殖、分化和基质合成。÷碱性成纤维细胞生 fibroblast 长因子(basic growthfactor，bFGF)是一种多肽调节因子， 对绝大多数来自中胚层和神经外胚层的细胞均具有刺激增殖活 性，在胚胎形成、血管新生、神经营养及创伤愈合等方面起重要作 用。迄今国内外学者对bFGF在人、鼠牙胚发育过程中的表达进 行了免疫组化研究，认为bFGF与成釉细胞、成牙本质细胞的分化 成熟及牙本质基质的沉积有关。本实验首次运用SP免疫组化技 术和图像分析手段，显示bFGF在恒牙牙根不同发育阶段的牙髓 中的表达及分布特征，探寻其在牙髓发育成熟中的作用。 材料与方法 牙髓标本取自多生牙、因阻生而拔除的第三磨牙或因正畸而 拔除的健康无龋牙齿。所有研究对象均无全身系统性疾病，近三 个月未曾服用免疫制剂和抗菌药物。将研究对象分成三组，即牙 根刚开始发育(第一组)、牙根发育中(第二组)、牙根发育完成(第 三组)。牙齿拔除后立即将牙齿纵向劈开，完整取出牙髓组织，放 入4％的多聚甲醛液中，4。C下固定。梯度酒精脱水，二甲苯透明， 石蜡包埋。每个标本于牙髓组织纵向最大面积处连续切片，厚 5p。m,做sP免疫组化染色。光学显微镜下观察阳性染色的分布及 强度。 snapfx／AX70软件系统 利用图像分析仪和MetaMorph／Cool 对阳性染色部位的透光强度进行定量分析(即灰度值的测定)。 随机选取8个视野，对每张切片的冠髓与根髓组织的外层部分和 中心区分别进行测量，结果取其平均值。用SPSS软件做统计学分 析。 实验结果 在牙髓组织中，bFGF主要在成纤维细胞、成牙本质细胞及血 管壁内皮细胞的胞浆中呈阳性着色，同时在细胞外基质中呈线网 状分布。年轻恒牙第一组牙髓的bFGF呈强阳性表达，第二组次 之，第三组成熟恒牙牙髓的bFGF呈弱阳性表达。随着牙根的发 育成熟，牙髓中阳性表达的成纤维细胞数逐渐减少。第一组牙髓 外层的bFGF灰度值大于中心区(P0．001)；第二组冠髓中心区 的bFGF灰度值大于冠髓外层(P0．05)；成熟恒牙的冠髓外层灰 度值大于年轻恒牙(P0．001)。各实验组的冠髓中心区灰度值 两两之间比较，有非常显著性差异(P0．001)。年轻恒牙的根髓 中心区灰度值低于外层(P0．05)，且低于成熟恒牙的根髓中心 区灰度值(P0．001)。 讨 论 国内外学者对牙髓细胞的体外培养实验研究表明，bFGF能 促进牙髓细胞DNA的合成，是牙髓细胞的潜在有丝分裂原；加入 bFGF使牙髓细胞的碱性磷酸酶(Alkaline 成受到抑制，而ALPase诱导牙髓细胞的终末分化和钙化。成牙本 ·2· 质细胞为终末细胞，失去增殖活性，bFGF对牙髓细胞的终末分化 和钙化的抑制作用对于牙髓发育和修复中牙髓细胞的募集(re。 cruitment)是必备的先决条件。 近年来的研究表明bFGF参与牙胚的形态发生和牙齿形成细 胞的分化。本实验采用免疫组化技术，发现牙髓中的成纤维细胞 表达bFGF，而且随着牙根的发育，牙髓中表达bFGF的成纤维细 胞数目逐渐减少，其染色强度逐渐减弱。因此，我们认为bFGF对 牙髓细胞的发育和成熟起着重要作用。实验结果显示年轻恒牙牙 根刚开始发育时，牙髓中心区的bFGF阳性表达强于牙髓外层，这 可能是造成年轻恒牙牙髓中心区ALPase活力减弱，髓腔壁和壁附 近的成牙本质细胞中ALPase活力最强的原因之一。有学者认为， 牙髓细胞在分化为成牙本质细胞之前，需要经过一个去分化的