MicroRNA-155和NK%2fT细胞淋巴瘤临床特征的关系及其对人NK%2fT细胞淋巴瘤细胞株SNK-6的生长调控研究.pdf

目 录 中文摘要…………………………………………………………………·1 英文摘要…………………………………………………………………-4 人NK／T细胞淋巴瘤细胞株SNK．6的生长调控的研究 前言……………………………………………………………………………………8一日lJ吾………………………………………………………………………………………’ 材料与方法………．．．………………………………………………“9 结果………………………………………………………………………………………·19 附图…………………………………………………………………·25 附表……………………………………………………………………………………”27 讨论………………………………………………………………………………………·31 结j沧………………………………………………………………………………………·33 参考文献……………………………………………………………·33 致{射………………………………………………………………………………………………46 个人简历…………………………………………………………………·47 中文摘要 MicroRNA．155与NK／T细胞淋巴瘤 临床特征的关系及对人NK／T细胞淋巴瘤细胞株SNK-6的 生长调控的研究 摘 要 胞淋巴瘤细胞株SNK一6细胞中的表达，探索其与NK／T细胞淋巴瘤临床特 征的相关性及其可能的作用机制，以期寻找NK／T细胞淋巴瘤新的肿瘤标 记物及预后预测指标。 方法： 北医科大学第四医院血液科的NK／T细胞淋巴瘤患者。所有患者均签署知 情同意书。正常人外周血来自于河北医科大学自愿者。人NK／T细胞淋巴 瘤细胞株SNK．6细胞获赠于郑州大学第一附院。 胞淋巴瘤细胞株SNK一6细胞培养于含体积分数约为15％人AB型血浆、 5％C02条件的培养箱中培养，48—72h传代一次。此时细胞生长良好，悬 浮成团，台盼兰染色拒染率95％以上。本研究相关实验均采用对数生长 期SNK．6细胞进行。 巴瘤患者、正常人外周血标本及SNK．6细胞中的基因组miRNA，以及 应用Trizol法提取SNK一6细胞株中的totalRNA，提取后将其置于一115℃ 恒温冰箱中保存备用。 后因素的相关性。 细胞增殖的影响。 取SNK．6细胞随机分为未处理组、封闭同源性siRNA对照组和封 中文摘要 48小时后离心收集细胞，后取未处理的细胞、封闭同源性siRNA对照组 液，置于培养箱内继续孵育4小时，后2500转／分钟，离心培养板20分 钟，吸去上清，每孔内加入1509l二甲基亚砜，振荡器振荡至结晶溶 解，于酶标仪490nm条件下，测定各孔的吸光度值(OD值)。 mRNA表 达水平的变化。 取SNK一6细胞随机分为未处理组、封闭同源性siRNA对照组和封 48小时后，根据RNA提取试剂盒、cDNA合成试剂盒、实时荧光定量 PCR试剂盒具体实验步骤检测NF．1出的mRNA表达水平。 7统计分析：所有数据结果分析应用的SPSSl7．0统计软件，P 0．05，认为有统计学意义。实验数据满足正态性分布的数据采用t检验， 不满足正态性分布的数据采用秩转换的非参数检验对患者及正常人外周 血两组miR-155基因表达差异进行统计学分析，应用殍检验、多因素分 析等对miR-155的表达与NK／T细胞型淋巴瘤患者临床特征进行频率分 析。 结果： 达。 达。 3 水平越高，骨髓浸润几率越大，疾病分期越晚及疾病的危险因素越多。 中文摘要 其预后。 率明显降低，证明miR．155表达促进肿瘤细胞增殖活性。 5 mRNA下 O 结论： 淋巴瘤的发生