干细胞因子Oct4在肝细胞癌中的表达及功能和机制研究.pdf

博士论文 正文 干细胞因子Oct4在肝细胞癌中的表达及 其功能和机制的研究 摘要 肝癌(主要是肝细胞癌，hepatocellularcarcinoma,HCC)的预后较差。目前， 手术切除仍为肝癌最有效的治疗方法。但即使根治性切除，5年内仍有60％-70％ 的转移复发率。转移复发已成为迸一步延长肝癌病人生存期、提高远期疗效的瓶 颈闯题，也是最终攻克肝癌的关键所在。 越来越多的证据表明肿瘤干细胞由于具有自我更新、产生和维持肿瘤生长和 导致细胞异质性的原始细胞及分化细胞的能力，是肿瘤发生和复发的根源。肿瘤 干细胞和其它成体干细胞高度相似，学者推测干细胞在体内通过长期的积累突变 而获得不确定的增殖能力进而转化为肿瘤干细胞。因此在分子调控水平研究干细 胞向肝癌干细胞发展的分子机制，有利于探索早期诊断和彻底治疗肝癌的新方 法。 研究发现Oct4、Sox2和Nanog在早期胚胎干细胞发育分化调节中发挥重要 作用，其通过调节胚胎干细胞的基因转录，从而维持其多潜能性和自我更新的能 力。 本课题首先研究此三个干细胞相关因子在HCC中的表达水平变化，并在此基 础上进一步研究Oct4的表达对肝癌以及肝癌干细胞的细胞生物学行为的影响及 其可能机制。 博士论文 第一部分肝细胞癌中干细胞相关因子Oct4，Sox2和Nanog的表达 水平及其与肿瘤复发和预后的关系 一、免疫组织化学检测肝细胞癌组织中干细胞相关转录因子Oct4， Sox2和Nanog的表达水平及其与预后的关系。 【目的】检测HCC组织中干细胞相关转录因子Oct4，Sox2和Nanog的表 达情况，评价相关因子对肝癌术后复发及生存的影响。 【方法】用免疫组织化学染色法对126例肝癌组织进行分析。研究Oct4， Sox2和Nanog在肝癌中的表达情况和并结合患者的病理资料分析了其表达水平 与肝癌患者术后复发和生存的相关性。 【结果】在HCC肿瘤组织中检测到了Oct4和Sox2的表达，但是没有检测 到Nanog的表达。 Oct4在HCC中主要分布在癌巢内，80例病人染色阳性(63．5％)，9例病人 癌旁染色阳性(7．1％)；在癌巢内，Oct4特异性着色在细胞核内，染色明显；统 计分析发现Oct4的表达与肝癌术后生存及复发无明显相关性。Oct4的表达与患 者的年龄，性别，甲胎蛋白，肝硬化，肿瘤大小，包膜有无，血管侵犯和肿瘤分 化情况均为明显相关性。 Sox2在HCC的分布有两种情况：一种情况是特异性表达在细胞膜上，在阳 性染色区域，可见细胞轮廓呈现明显的深棕色，胞浆胞核和细胞间质无明显着色： 另一种情况就是特异性的表达在胞浆，呈颗粒状聚集、簇状分布在胞核附近。癌 旁组织内有Sox2均匀的非特异性着色；癌组织内Sox2在细胞膜上的表达与肝 癌术后生存和复发没有明显的相关性；Sox2在癌巢胞浆的表达与总生存没有明 阴性患者的至复发时间明显比Sox2阳性的患者要长。Sox2的表达情况与患者的 年龄，性别，甲胎蛋白，肝硬化等临床病理学特征没有明显相关性。 【结论】HCC组织中0ct4和Sox2的表达水平明显上调，且与HCC预后有 关。 平表达。 2 博士论文 摘要 【目的】鉴于肝癌组织结构和病理特征的复杂性，利用免疫组化方法明确的 判定肝脏癌组织和癌旁组织有一定的难度，所以，我们利用特异性Taqman探针 的关系。 探针引物实时定量PCR，检测HCC中Oct4和Sox2的m_RNA表达水平。 【结果】与免疫组化的结果一致，Oct4主要在癌组织中表达(p；0．0157)； Sox2主 验证了Sox2免疫组化结果中癌旁的均匀着色为非特异性的背景染色， 要在癌组织中表达(p=0．022) 组织。 三．不同转移潜能的肝癌细胞系中Oct4和Sox2的表达水平 【目的】研究Oct4和Sox2在不同转移潜能肝癌细胞系的表达水平，进一步 验证其在肝癌发展过程中发挥的作用。 【方法】(1)选取并培养不同转移潜