dna复制始蛋白mcm6-cdt1相互作用的研究.pdfVIP

论文摘要 在所有真核细胞中，基因组DNA的复制都受到严格的控制，以保证在每个细 胞周期中DNA仅准确的复制一次。DNA复制的起始阶段是整个复杂的复制过程中至 为关键的一步，该过程受复制前复合物(pre．replicationcomplex，pre．RC)的严格控 制。微小染色体维持蛋白(minichromsome 的重要组分，该复合物是由同一家族结构类似的6个亚单位(Mcm2．Mcm7)组成， 目前被认为是DNA复制过程中的解链酶并在复制叉的延伸过程中起关键作用。在 细胞周期的M晚期和G1早期，Mcm2．7复合物依赖于另一个pre．RC的重要亚单位 Cdcl0依赖性转录因子(Cdcl0dependenttranscriptl，Cdtl)而结合到染色质上面。 Mcm6是Mcm2．7复合物中的一个亚单位，由位于蛋白中部的MCM结构域和C．末 端尚未被研究的结构域构成。 本文研究表明，高度保守的Mcm6C．末端能够与Cdtl相互作用。我们将与 Cdtl相互作用的区域称为Cdtl结合结构域(Cdtl bindingdomain，CBD)，并通过高 分辨率核磁共振实验解析出其空间结构，CBD的结构呈现典型的‘winged．helix” 折叠。winged．helix”折叠通常参与蛋白质．核酸的相互作用，本文的研究发现CBD 同DNA没有直接相互作用，表明CBD特异性的参与蛋白质一蛋白质之间的相互作 用。同时我们也发现了为于Cdtl上面与Mcm6相结合的区域(Mcm6binding domain，MBD)。利用核磁共振滴定实验，我们确认出位于CBD上面直接参与Cdtl 相互作用的氨基酸，E757和L766。我们通过生化学以及细胞学实验验证了这两 个氨基酸在Mcm6．Cdtl相互作用中的关键作用。 在解析CBD结构的基础上我们已经解析出高分辨率的CBD—MBD复合物结 构。研究表明，Cdtl在Mcm2．7复合物的染色质结合过程中起关键作用，但是Cdtl 作用的分子机制目前仍未知。为了阐B#JCdtl在pre．RC形成过程的具体作用机制， 在对CBD—MBD复合物进行生化以及结构学研究基础上，我们已利用爪蟾卵提取 物设计、进行相关实验，并取得令人鼓舞的结果。我们认为，Mcm6通过其CBD 与Cdtl MBD的相互作用可能引起Mcm2．7复合物与染色质相结合而完成pre．RC 的装配，我们已经完成以及正在进行中的研究工作为深入理解DNA的复制起始机 理提供了重要依据。 关键词：DNA复制起始，复制前复合物装配，染色质结合，Cdtl结合结构域，Mcm6 结合结构域，核磁共振结构 Abstract all In cells，initiationof DNA is controlledto eukaryotic genomicreplicationtightly ensurethatDNA OCCurS in replication onceeachcell only cycle．DNAreplication the initiationis critical thewholeDNA stepduring replicationprocess，initiation is controlledtheformation stepstrictly by of pre·replication is ofseveral and the． composed importantproteincomplexesproteins including minichromosomemaintenan