同源盒基因HoxB2在血管内皮细胞增殖及其放射损伤中作用的初步的研究.pdfVIP

同源盒基因HoxB2在血管内皮细胞增殖及放射损伤 中作用的初步研究 摘要 (慢性、难愈合的伤口或创面在临床较为常见，目前临床上尚缺乏简便 有效的治疗方法，因此寻找有效的促创面愈合物质是创面修复研究的热 点。各种创伤修复必须由细胞增生分化和细胞间质的形成来完成，其中肉 芽组织的增生起着重要的作用。肉芽组织中有丰富的毛细血管，向修复组 织提供氧和所需的营养物质：微循环结构和功能的恢复是创面修复的中心 环节，因此，改善创面微循环能促进创面愈合。毛细血管内皮细胞受许多 血管生成因子的作用而发生增殖、趋化，向修复区域延伸和迁移，导致创 面的肉芽化，促进毛细血管网的修复，毛细血管的形成较为复杂，其关键 过程包括内皮细胞增殖和新生毛细血管周围细胞间质的降解，同时一些生 长因子如vEGF能促进创面的愈合，因此，研究内皮细胞的增殖及其与生 长因子的关系有利于创面修复机制的阐明。 同源盒基因编码的同源蛋白作为转录因子，在胚胎发育、细胞生长、 分化和某些组织特异性基因的表达中发挥作用。既往研究表明HoxB2基因 在造血祖细胞中的选择性表达与造血细胞的增殖和分化关系密切，但作为 与造血细胞起源相同的内皮细胞其增殖与HoxB2基因的关系目前未见报 道。近来的研究已经证实了HoxB2在内皮细胞中的表达。在同一表达区域， 上游基因调控下游基因的表达是同源盒基因的表达特征之一，因此HoxB2 有可能参与了对内皮细胞增殖的调控。4一 本课题为国家重点基础研究发展规划项目“严重创伤早期全身性损害 与组织修复的基础研究”中“创伤修复失控发生机制研究”的子课题，因 此，本研究拟在探讨HoxB2与内皮细胞增殖关系的同时，对其与放射损伤 的时效、量效及其与VEGF的关系进行初步研究。 V (首先，以体外培养的人脐静脉内皮细胞为模型，采用反义技术研究 HoxB2反义寡核苷酸对内皮细胞增殖的影响，利用荧光标记的反义寡核苷 酸经脂质体转染观察其在内皮细胞中的分布规律：应用MTT法检测其对 细胞存活率的影响；采用3H．TdR掺入法观察其对DNA合成的影响；采用 流式细胞仪测定细胞周期的变化：同时采用RT．PCR研究寡核苷酸对靶基 因表达的影响。 结果表明，在脂质体介导下加入Asodn后15分钟细胞有较弱的细胞 核染色，4小时到8小时细胞核有较强的荧光积聚，同时胞浆内荧光呈离 散型、点状分布，16小时荧光开始消散；反义寡核苷酸对内皮细胞增殖具 有明显的抑制作用，并表现出剂量依赖效应，同时延缓了细胞由G1期向s mRNA的表达，而随机序列对 期的转变，在24h、48h明显抑制了HoxB2 内皮细胞增殖、细胞周期及靶基因表达无明显抑制。 其次，应用HE染色及MTT法观察了不同照射剂量对内皮细胞形态及 增殖的影响：采用RT．PCR研究了放射损伤与HoxB2表达的时效、量效关 系；采用免疫细胞化学和RT．PCR法研究了HoxB2与VEGF的关系；最后 初步探索了VEGF对内皮细胞放射损伤的保护作用。 结果表明，6Gy和12Gy照射对内皮细胞增殖活性的影响截然相反，小 剂量表现为增强，较大剂量则呈现抑制效应；而HoxB2表达也表现出同样结 果；HoxB2 HoxB2mRNA水平；VEGF能明显拮抗12Gy照射引起的内皮细胞损伤。／ 通过本研究得出以下结论： 1．HoxB2在内皮细胞增殖中起重要作用。 2．HoxB2有可能通过VEGF发挥其对内皮细胞增殖的调控作用。 3．HoxB2表达水平可作为内皮细胞增殖和损伤程度的指标。 4．VEGF可作为放射损伤的拮抗剂，在创面修复中具有很好的应用 前途。 关锄司，同源盒基因、人脐静脉内皮细胞增殖放射损伤反义寡核苷酸VEGF VI A on theRolesofHoxB2inthe PreliminaryStudy of vascularendothelialcellsandonthe pr