环境胁迫对棘胸蛙(Paa+spinosa)抗坏血酸生物合成能力影响.pdfVIP

环境胁迫对棘胸蛙Paaspinosa)抗坏血酸及其生物合成 能力的影响 ‘． 摘要 全球两栖动物数量下降已经成为近年来倍受关注的热点问题。其原因可能是复杂多 变的，如气候变暖、病菌入侵等。两栖动物作为水生到陆生的过渡类群，具有特定的生 物学和生态学特征，它们对环境变化特别敏感，因此一直被作为生态环境监测的重要指 示类群。抗坏血酸(Ascorbic Acid，AA)作为一种重要的多功能营养素，在动物的骨骼 发育、抗应激、免疫及抗氧化等方面都起着重要的作用，而且在进化上是两栖类和爬行 类抗氧化物质的典型代表。鉴于AA在生物学功能上和进化上的重要性，本课题选择 oxidase， GLO，EC1．1．3．8)活性作为判断两栖类机体健康状态和生存力的生物学标志 (Biomarker)，研究其在胁迫状态下的反应速度和敏感性。 棘胸蛙(Paa spinosa)通常栖息于亚热带或热带的高海拔山区，对环境因子如致病微 生物和气候因子的变化比较敏感，抵抗环境胁迫的能力较低，可以作为环境变化的监测 指示物种之一。此外在养殖条件下棘胸蛙的发病率较高，这进一步说明其对环境的敏感 性。因此本课题选取棘胸蛙作为研究对象，通过人工模拟细菌入侵及暖冬状态，研究其 组织AA水平及其生物合成能力的变化规律。主要结果如下： 生境压力评价指标，研究了野生与养殖棘胸蛙的健康状态及生存力。GLO活力的测定． 方法主要采用二硝基苯肼比色法，从底物(古洛糖酸内酯)浓度、谷胱甘肽浓度、孵育时 间及温度四个方面对酶活进行优化。结果表明：底物浓度为10mM，谷胱甘肽浓度为0mM， 可溶蛋白_／h。通过比较发现养殖棘胸蛙GLO活力较野生种群高，但其组织AA含量却低 于野生个体，换言之，养殖棘胸蛙在生存环境下体内消耗的AA较多，这与他们的生存 压力是一致的，说明组织AA水平和GLO活力可以作为棘胸蛙生境压力的评价指标。 2．为了模拟病原体入侵导致机体的炎症反应及由此造成的氧化压力，本实验通过注 射经高温灭活的大肠杆菌(Escherichia 取样测定脾巨噬细胞呼吸爆发、组织AA含量及GLO活力，研究了养殖棘胸蛙在细菌 胁迫状态下各指标的动态变化规律。结果显示，注射热灭活的大肠杆菌导致脾巨噬细胞 各项指标在24h内均能恢复至初始水平。说明注射热灭活的大肠杆菌可以刺激棘胸蛙脾 巨噬细胞产生较多的氧自由基，增加机体的氧化程度。同时也证实了组织AA水平及 GLO活力在一定程度上能够有效地反映棘胸蛙在细菌胁迫下的健康状况和生存力。 3．不同冷暴露温度对野生和养殖棘胸蛙组织AA含量、GLO活力及能量利用的影 眠条件下的死亡率较高，证明较高的冬眠温度或较高的冷暴露温度对野生棘胸蛙具有明 显的致死作用，直接证明了暖冬可以干扰蛙类正常冬眠而导致其死亡。但12C对养殖个 体无致死作用，这可能是由于长期暖驯化使养殖棘胸蛙对暖冬耐受力提高。与冷暴露前 相比，两个冬眠温度下野生棘胸蛙肝脏和肾脏AA含量及GLO活力均有所下降，但仅 依赖性。这些结果说明较高的冬眠温度使AA大量消耗，暗示冬眠温度的升高会给蛙类 带来更大的氧化压力。因此组织AA水平可以反映冷暴露给蛙类带来的氧化压力，能够 作为该类胁迫的生物学标记。野生棘胸蛙在4C还表现出低温耐受性适应，如肝糖原含 在4C人工冬眠条件未出现肝糖原升高的低温耐受性变化，而其对肝脏内的非脂肪干物 质的消耗显著增多，说明养殖棘胸蛙对低温适应能力的下降。 综上所述，棘胸蛙在细菌刺激和遭遇暖冬干扰的情况下，组织AA含量和GLO活力 均出现相应的变化，反映了机体受胁迫的状态，说明组织AA含量和GLO活力能够作为 生物学指标反映机体的健康状况和生存力，且棘胸蛙对于环境的变化具有足够的敏感 性，可以将其作为环境变化的监测指示物种之一，根据其在环境中的受害症状，可以及 时对环境作出预报。此外，本研究还可以为棘胸蛙的养殖和保护提供一定的参考依据。 关键词：棘胸蛙：GLO：AA；细菌刺激：冷暴露 II THE EFFECTOFSURV¨绺L]LPRESSURES