牙龈卟啉单胞菌唾液酸酶基因功能.pdfVIP

·中文论著摘要· 牙龈卟啉单胞菌唾液酸酶基因功能研究 刖 吾 唾液酸是一种九碳糖酸，在真核细胞和原核细胞中唾液酸用于修饰细胞分子， 通常位于糖结合物如糖蛋白，糖脂的末端，这些糖结合物在真核细胞表面，血清 及唾液中普遍存在。有实验表明唾液酸与细菌的营养，细菌细胞结构的形成及细 菌与细胞的相互作用有关。细菌利用的唾液酸的来源有两种：内源性合成和外源 性分解。有些细菌本身有合成唾液酸的能力，通过自身代谢合成唾液酸，即内源 性合成；而另一些细菌是通过唾液酸酶水解糖结合物最末端的残基从而获得唾液 酸，即外源性分解。因此细菌编码的唾液酸酶及其在不同细菌中的功能倍受学者 们的关注。 唾液酸酶是一种水解酶，可以选择性的水解糖结合物末端的残基，从而获得 游离的唾液酸，唾液酸酶分两类：内切酶和外切酶，外切酶能够切割0【．(2—8)键 的唾液酸残基，外切酶能够切割a．(2_3)，Q一(2_6)，a．(2一÷8)键的唾液酸残基。 实验表明细菌的唾液酸酶可能与细菌的生长和毒性有关。Thompson等发现福赛 氏坦纳菌唾液酸酶基因(NanH基因)参与唾液酸的代谢；Honma等发现福赛氏坦 纳菌的NanH基因同样参与了福赛氏坦纳菌与上皮细胞的相互作用。此外， Banerjee等研究表明肺炎链球菌唾液酸酶与细菌的内化有关。Tong等研究发现肺 炎链球菌唾液酸酶(Nart4)突变株丧失了粘附的能力。由此可见，唾液酸酶在细菌 的生存和致病过程中所起的作用不容忽视。 牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas 菌之一，包含很多毒力因子，如菌毛，蛋白酶等，这些毒力因子在Pgingivalis 的粘附和致病过程中发挥了重要的作用。通过P．gingivalisW83全基因组序列我们 发现PG0352是唾液酸酶的同源基因，推测PG0352在P gingivalis中编码唾液酸 生长和致病过程中所起的作用。 材料和方法 一、实验材料 l、主要试剂、仪器： TSB培养基(Fisher，美国) 质粒提取试剂盒(Qiagen，美国) DNA凝胶回收试剂盒(Qiagen，美国) DNA 引物(Integratedtechnologies，美国) PCR扩增仪(Bio．RAD，美国) 电泳仪(Bio．1乙∞，美国) 自动凝胶成像分析仪(GDS8000，UVP公司，美国) 厌氧培养箱(anarobic system，美国) 电穿孔仪(ECM630，BTX公司，美国) 5’RACE试剂盒(Ambion，美国) ～， 紫外分光光度计(Bio．Rad，美国) ． 96孔板(Falcon，美国) 酶标仪(Bio．Rad，美国) DIG标记及杂交试剂盒(Roche，美国) 2、实验菌株，质粒及载体： P W83 gingivalis P ATCC33277 gingivalis FDC381 只gingivalis 33520 齿垢密螺旋体(T．denticola)ATCC Ecoli DH5ct(NEB，美国) ‘ pGMT easy载体(promage，美国) Shama教 质粒pVA2198(由纽约州立大学布法罗分校口腔生物实验室Ashu 授馈赠)