g-四链体hemin dna酶的催化反应的研究及应用.pdfVIP

摘要 摘要 G．四链体是DNA的二级结构，可以与氯化血红素(heroin)结合形成具有 过氧化氢酶活性的DNA模拟酶，称之为G一四链体．heminDNA酶(简称G．四链 磺酸))生成在波长九=418n／n处有特征吸收的绿色产物ABTS一。本论文中结合 此种DNA酶的特点设计开发了一种快速简便检测ATP和H矿的新方法：同时 着重探讨了ATP对G．四链体-heminDNA酶参加的催化反应的促进作用。 G．四链体-hemin DNA酶应用于ATP和H92+传感器的设计：结合寡核苷酸 以与ATP特异性结合的事实，我们将特异性识别ATP的DNA适配体结合在富 G序列的一端形成一条长的核苷酸链；同样根据H92+和胸腺嘧啶(T)可以形成 T_H92+_T的金属碱基配对，使错配的T-T碱基更稳定的事实，将通过T．T错配折 叠成分子内双链的DNA序列插入富G序列中间也形成一条长的核苷酸链(3：1拆 分模式的G．四链体)。相应地再设计另一条短链与长的核苷酸链的部分互补。有 效地利用DNA／DNA双链和DNA／目标物复合体之间的竞争，即在没有目标物 (ATP或H92+)存在时，长核苷酸链与短核苷酸链互补而破坏G．四链体的形成； 在目标物存在下，ATP与适配体特异性结合或T_H92+．T金属碱基配对有助于G． 四链体的形成，同时促使具有催化活性的G．四链体-heroinDNA酶的形成，从而 开发一种快速简便检测ATP和H92+的新方法。 ATP对G．四链体-heminDNA酶参加的催化反应的影响：尽管G．四链体 -heminDNA酶已经广泛应用于化学传感器的设计，但有一些挑战性的问题限制 了其更远的发展和应用，如：相对比较低的催化活性和反应产物ABTS一的歧化 现象。本论文中证实了ATP对G．四链体-heroinDNA酶参加的催化反应的影响， 结果表明ATP不仅可以增加DNA酶的催化活性，也可以抑制ABTS一的歧化作 用。这些发现可能会改进现存的基于G．四链体-heminDNA酶的化学生物传感器 的性能(如基于G．四链体．heroin DNA DNA酶的Af检测)，扩大G．四链体．hemin 酶的应用范围，使ABTS成为裸眼检测的理想底物。此外实验证明了磷酸基团、 摘要 核苷碱基和核糖三部分共同决定了ATP促进反应的能力，这可以帮助人们设计 更高效的G．四链体-heminDNA酶的增效因子。 关键词：G-四链体heminDNA酶ATP Ia92+ II Abstract Abstract are inwhichG·-richnucleic structures acid higher-order G--quadruplexesunique formstacked of connected base sequences arraysG—quartets byHoogsteen-type hasbeen thatsome could and pairing．It reported G—quadruplexesspecificallytightly bindto with hemin，formingG—quadruplex·hemincomplexesperoxidase-likeactivity． These ca