gma-s共聚物的制备及其固定化米曲霉β-半乳糖苷酶的研究.pdfVIP

摘  要  摘 要 以甲基丙烯酸缩水甘油酯和苯乙烯为单体，环己醇和十二醇为液体制孔剂，纳米碳 酸钙为固体制孔剂，偶氮二异丁腈（AIBN ）为引发剂，通过本体聚合的方法制备出甲 基丙烯酸缩水甘油酯-苯乙烯共聚物，粉碎后取0.15到0.30mm之间大小的颗粒作为固定 化酶载体。通过实验摸索固定化酶的最佳纳米碳酸钙用量，固定时间，温度和pH ，分别 测定了自由酶，液体制孔剂载体和固液双制孔剂载体固定化酶的性质（温度，pH对酶促 反应的影响，固定化酶的热稳定性，酸碱稳定性和操作稳定性）以及动力学参数。结果 表明：本体聚合法方法简便，用固液双制孔剂制备的载体固定β-半乳糖苷酶，单位载体 上的酶活力达535.11 U/g，高于液体制孔剂载体固定化酶的酶活力。 通过悬浮聚合法制备液体制孔和固液双制孔甲基丙烯酸缩水甘油酯-苯乙烯聚合物 载体，并分别用于固定β-半乳糖苷酶。最佳操作条件下，测定和比较了自由酶和固定化 酶的性质及动力学参数，结果表明：固液联合制孔得到的载体表面具有更多的孔结构， 其固定化酶效果也较本体聚合法更加突出。固定化酶对热，pH值耐受范围较自由酶宽， 操作稳定性好。 悬浮聚合法制备了多孔磁性小球载体，用于固定β-半乳糖苷酶。电镜显示小球表面 孔结构明显，通过X射线能谱和磁天平验证了小球的磁性。在最佳操作条件下，测定了 磁性小球载体固定化酶的酶活性回收率，单位载体上的酶活力，基本性质和动力学常数。 -4 3 结果表明：磁性小球磁化率为1.25×10 cm /g ，用磁性小球载体固定化酶，单位载体上的 酶活力达412.09 U/g ，高于本体聚合法和悬浮聚合法制备的非磁性载体固定化酶的酶活 力。动力学性质研究表明：磁性小球良好的热酸碱稳定性，具有广阔的应用前景。 关键词 甲基丙烯酸缩水甘油酯 苯乙烯 固定化 β-半乳糖苷酶 磁性小球 I Abstract Abstract Two kinds of macroporous poly(GMA-ST) were synthesized by bulk copolymerization using different pore-forming agents, one only with liquid porogenic agent including cyclohexanol and lauryl alcohol and the other simultaneously with a mixture of cylohexanol, lauryl alcohol and nano-calcium carbonate. After the polymer was smashed, particles with diameters ranging 0.15mm to 0.30mm were taken as the carrier. Scanning electron microscopy (SEM) micrographs were done to character its surface structure. Under the optimum conditions, β-galactosidase was immobilized on the carrier obtained above, the enzyme activity, the activity yield and the basic properties of the immobilized enzyme were determined separ