多孔三元共物gma-nvp-mba的制备及其对豇豆酯酶的固定化研究.pdfVIP

Classified Index: CODE: 10075 U.D.C.: NO: A Dissertation for the Degree of M. Science Preparation of Porous Terpolymer(GMA-NVP-MBA) and its Application Study on Immobilizing Cowpea Esterase Candidate: Ming Xue-jie Supervisor: Prof. Sun Su-fang Academic Degree Applied for: Master of Science Specialty: Physical Chemistry University: Hebei University Date of Oral Examination: June, 2014 摘 要 摘 要 豇豆种子经浸泡，捣碎，冰箱4 ℃下放置提取12h 后，离心取上清液，对上清液进 行分段盐析，透析后得到豇豆酯酶粗酶液，测定了豇豆酯酶自由酶酶促反应的最适反应 温度、最适pH 值，pH 稳定性，热稳定性，储存稳定性等相关性质。 以甲基丙烯酸缩水甘油酯 （GMA ）、N- 乙烯基吡咯烷酮 （NVP ）为单体，N,Nˊ-亚 甲基双丙烯酰胺为交联剂，甲醇水溶液为致孔剂，采用悬浮聚合法制备了多孔聚合物微 球，并用于豇豆酯酶的固定化研究。通过实验摸索了GMA、NVP 、MBA 三者的用量关 系，酶的最适固定化时间、温度、pH 值以及酶液浓度等相关固定化条件及该固定化酶 酶促反应的最适温度、最适 pH 值，pH 稳定性，热稳定性，操作稳定性等相关性质。 结果发现：由于亲水性单体NVP 的引入，载体小球亲水性得到提高，该性质更有利于 其与豇豆酯酶的结合，因而酶的固定化效果较好，且相对自由酶来说，固定化酶的酸碱 稳定性，热稳定性均有明显提高，操作稳定性表现良好。 采用固液双致孔方式制备了GMA-NVP-MBA 高分子聚合物载体，利用扫描电子显 微镜对微球的表面结构进行了研究，并与单纯液相致孔所得微球进行比较，结果发现： 固液双相致孔制得的微球有更多的孔表面结构，有更大的比表面积，更有利于酶的固定 化。在最优化条件下，每克干燥载体上固定化酶酶活力值为 33.19U,活性回收率为 61.47%，而单纯液相致孔所得载体固定化酶活力为 18.97U/g，活性回收率为33.10% 。 动力学性质的测定表明该固定化酶pH 稳定性，热稳定性，操作稳定性均较好。由此可 见，固液双致孔法制备的聚合物载体更有利于酶的固定化，具有非常广泛的应用前景。 关键词 甲基丙烯酸缩水甘油酯 N- 乙烯基吡咯烷酮 N,Nˊ-亚甲基双丙烯酰胺 豇豆酯酶 固定化 I Abstract Abstract The cowpea esterase was extracted as follows: Cowpea was soaked in phosphate buffer solution and then was crushed and placed in fridge at 4 ℃for 12 hours. The cowpea residue was s