聚多巴胺接聚乙二醇毛细管涂层的制备及其用于生物大分子分离的研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 毛细管电泳（capillary electrophoresis, CE ）具有高效、快速、微量以及经济 环保等优点，在多肽、蛋白质、DNA 等生物大分子的分离方面应用非常广泛。 但是由于生物大分子与毛细管内壁之间静电及疏水等相互作用的存在，使得生物 大分子尤其是碱性蛋白质极易吸附在毛细管壁上。从而造成蛋白质分离效率下 降、重现性差、峰形展宽等问题，严重制约了毛细管电泳在该领域的应用。 目前，最有效且用得最广泛的抑制蛋白质吸附的方法是管壁的惰化。其中， 聚乙二醇（PEG ）因其良好的亲水性、优异的抗蛋白质吸附能力、无毒以及很好 的生物相容性而备受青睐。聚乙二醇及其共聚物已成功地应用于毛细管电泳分离 蛋白质、多肽、DNA 等生物分子。然而，由于 PEG 具有很强的亲水性，与毛细 管内壁作用力很弱，使用多次后容易被缓冲溶液冲出毛细管，对蛋白质吸附的抑 制作用减弱。从而导致分离效率降低，涂层管寿命缩短，不能长期使用。 小分子多巴胺在碱性环境下，在氧气的作用下能自发氧化聚合形成具有强粘 附性能的聚多巴胺。聚多巴胺不仅具有强粘附性，而且还含有丰富的官能团能够 通过迈克尔加成反应或希夫碱反应接枝具有-SH、-NH2等基团的聚合物。因此， 聚多巴胺涂层表面可以形成有机物质层,从而改善材料的表面性能。 本论文通过强粘附性的聚多巴胺涂层将具有强抗蛋白吸附性能的 PEG 牢牢 地键合在毛细管内壁，形成有效而稳定的聚合物涂层应用于蛋白质和双链 DNA （dsDNA ）的分离。主要进行了以下的研究工作： 1. 聚多巴胺接枝聚乙二醇（polydopamine-graft-PEG ）涂层毛细管的制备及表征 首先，将羟基聚乙二醇还原成更具活性的氨基聚乙二醇，反应产物的结构采 用核磁共振氢谱（1H NMR ）和红外光谱（FTIR ）表征。然后，采用简单而有效 的两步法将氨基聚乙二醇通过与聚多巴胺涂层发生迈克尔加成反应或希夫碱反 应，从而键合在毛细管内壁，形成 polydopamine-graft-PEG 涂层。涂层的化学组 成及形貌分别采用 X 射线光电子能谱（XPS ）和扫描电子显微镜（SEM）来表 征。 2. Polydopamine-graft-PEG 涂层毛细管在分离蛋白质中的应用 聚多巴胺涂层能够牢牢地将 PEG 键合在毛细管内壁，提高了 PEG 涂层的稳 定性。聚合物涂层在起到稳定电渗流作用的同时，在一定的 pH 值范围内能实现 对三种碱性蛋白质（细胞色素 C （Cytochrome C）、溶菌酶（Lysozyme ）和核糖 核酸酶 A （Ribonuclease A ））的快速及高效分离。此外，还分别比较了 polydopamine-graft-PEG 涂层毛细管与商业涂层毛细管分离六种酸碱中性混合蛋 白的性能以及在不同 pH 下分离三种碱性蛋白质的性能。考察了 polydopamine-graft-PEG 涂层毛细管连续 200 次分离碱性蛋白质的分离结果。实 I 摘 要 验结果证明了 polydopamine-graft-PEG 涂层能有效地调节 EOF 的大小以及抑制 蛋白质的吸附，是一种非常稳定，性能优异的涂层。 3. Polydopamine-graft-PEG 涂层毛细管在食品分析中的应用 Polydopamine-graft-PEG 涂层能有效地抑制蛋白质的吸附，且具有很好的稳 定性。因此，Polydopamine-graft-PEG 涂层能够应用于奶粉中三种主要乳清蛋白 质（α-lactalbumin、β-lactoglobulin A、β-lactoglobulin B ）的定性定量分析。此外， 该涂层还能有效地分离鸡蛋清蛋白质和无脂花生蛋白质。通过与未涂覆的毛细管 比较，说明了该涂层能有效地应用于食品蛋白质的分析。 4. LPA 的合成及其应用于polydopamine-graft-PEG 涂层毛细管中分离 dsDNA Polydopamine-graft-PEG 能有效抑制 dsDNA 在毛细管内壁的吸附，LPA 具 有优良的筛分性能