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贵州农业科学2012，40(7)：51～55
Guizhou Sciences
Agricultural
[文章编号]1001
兜兰ITS—PCR反应体系的建立及优化
陈业，张玉晶，李娅迪，江辉，沈文华，关萍。
(贵州大学生命科学学院，贵州贵阳550025)
[摘
用单因子试验设计，对影响兜兰DNAIT孓PCR扩增反应的主要因素即TdqDNA聚合酶的用量、Mg”浓
度、dNTP浓度、引物退火温度、模板DNA用量和引物浓度等进行优化研究，建立兜兰最佳ITS扩增反应体
buffer DNA酶1．25
系。结果表明：最佳反应体系为25肛L体系中，添加10×PCR2．5肚L、丁口q u、Mg抖1．5
O．15 40
mmol／L、dNTP min，1个循
mmol／L、引物o．6肚mol／L和模板DNAng，反应程序为94℃预变性4
环；94℃变性30s，54℃退火45s，72℃延伸lmin，35个循环；72℃延伸7min后终止反应，4℃保存。利用此
反应体系可得到预期大小的ITS基因片段。
[关键词]兜兰；ITS—PCR；基因组DNA；反应体系
[文献标识码]A
[中图分类号]S682．31：Q781
COnstructiOnand oflTS—PCRReactiOn for
Optimization SystemPap，1fopedf／u门r7
CHEN Yu Ya Wen—hua，GUAN
Ye，ZHANG Hui，SHEN
di，JIANG
jing，LI Ping+
sciettce，GⅡizhou 5S0025，cktnn)
(CotlegeofLife U．1iversit，，GHi，nHg，GHizlmH
theITS—PCR for as
Abstract：To reaction
system
optimize P口声矗io声已diZ“m，takingP以声矗iD声已dif“m
theeffectsof
thetotalDNAwasextracted and factors，
the CTAB，
material， byimproved including
dNTP DNA
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