猪链球菌2型及其毒力因子检测多重PCR的建立和应用.pdfVIP

V01．26No．1 28 中国兽医学报2006年1月第26卷第1期(MlnJy甜sffJan．2006 猪链球菌2型及其毒力因手检测多重PcR的建立与应用 马清霞“2，何孔旺¨，陆承平1 农业部畜禽疫病诊断重点开放宴验室，江苏南京2lool4) 摘要：根据相关文献设计并合成弓1物。建立了能同时检测猪链球茼2型(cps)厦其重要毒力因子溶茵酶释放蛋白(mrp) 和细胞外因子(epf)的多重PcR方法。目的片段的太小分别为885bp(mrp)、675bp(cps)扣443bp(8pf)。对参考茵株、 人工攻毒病料和临床收集痛料的检测结果显示，该多重PCR特异性强、敏感性高，可直接从临床病料中检测出猪链球 菌2型，并能鉴定其毒力因子表型。 关键词：猪链球菌2型}毒力因子；多重PcR 4545(2006)01—0028一04 文献标识码：A 文章编号：1005 中图分类号：Q78；s852．61 我国猪源链球菌的病原苗中主要有猪链球菌2型 经间接乳胶凝集试验及分型PcR检测为ss2，由江苏省农业 998 (Sfw户mf州似5s“厶。恤2．Ss2)和马链球菌兽疫死种。自l 科学院兽医所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室保存。阴 年在江苏某地暴发了由ss2引起的猪链球菌病“来，国内对 此病原的研究日益深人_d。ss2菌株的毒力与其毒力因子关 系密切。据vecht等，2报道，ss2荷兰分离株存在2种毒力相 关蛋白，相对分子质量分别为136ooo和110000的溶菌酶释 Ldase re】eased 放蛋白(muram protein，MRP)和胞外因子(ex一 №cellularfactor．EF)。smlth等‘”进一步证实，MRP、EF是震荡培养过夜。 ss2强毒的标志。从欧美及澳大利亚等周分离的ss2菌株的 毒力都与这2种蛋白有很强的相关性[|5；。根据对我国江苏省 白鼠(体质量约20 及周边地区分离株毒力因子的表型鉴定发现，从病猪体内分 kg，20只)，均由江苏省农科院兽医所实验动物中心提供。 离的多为强毒力表型，且毒力表型与其对猪，兔致病性密切相 1．3引物的设计与合成根据已发表的r声厂基因序列”J，通 859 关68]。因此，对ss2的检测不仅要进行血清型定型，还应进行过DNAstar的M。gAllgn分析表明，在1～2bp之间同源 860～4375 毒力凶于的鉴定。本试验旨在在单PcR检测的基础上，建立 性极高，而在2 bp部分同源；而通过分析F∥， 310～6．74d 间时鉴定ss2及其主要毒力因子基因e∥与棚≯的多重啦厂’基因表明：e∥’基因5 bp主要足重复序列， 375 860～4 r(：R，并通过优化反应条件和组分组装成快速检测试剂盒，以 并且与r矿基因2 bp的同源性很高，因此上游引 800 期用于ss2的流行病学调查和快速诊断。 物选在咖，基因2 bp附近的位置，下游引物应在啦，基