茶树cDNA文库构建及新梢特异表达基因EST序列分析.pdfVIP

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  • 2015-10-28 发布于江苏
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茶树cDNA文库构建及新梢特异表达基因EST序列分析.pdf

摘要 茶树是一种重要的经济作物。茶叶是世界最流行的饮料之一,对人体有重要的生理保 健作用。为了更好了解茶树新梢表达基因,并筛选出感兴趣的目的基因,本文构建了龙井 43和安吉白茶等两个品种的新梢cDNA文库,并对龙井43文库进行较高通亮通量的EST 测序和生物信息学分析。本研究获得的主要结果如下: 1. A的mRNA,LD-PCR 以Trizol一步法从春茶新梢中提取总RNA,分离纯化富含P01y 的滴度分别为6.8x105pfu/mL和4×105pfu/mL,符合高质量文库的要求,。文库的重组 率为98,05%和96.15%,且插入片段的长度在1.0.1.5kb左右,说明文库是完整的、有 效的。两个文库总克隆数分别为3.5x105个和2.1x105个.高于所需标准。 2. 上引入2个跚酶切位点后,构建了一个新载体sl豇-puc。用新载体构建一个用于测 序的质粒文库。 3. 从龙井43新梢cDNA质粒文库中随机选取4320个克隆进行测序,根据EST标准获得 长度大于200bp的有用序列为2963个,测序成功率为占总克隆的68.60%。通过

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