茶树cDNA文库构建及新梢特异表达基因EST序列分析.pdfVIP

摘要 茶树是一种重要的经济作物。茶叶是世界最流行的饮料之一，对人体有重要的生理保 健作用。为了更好了解茶树新梢表达基因，并筛选出感兴趣的目的基因，本文构建了龙井 43和安吉白茶等两个品种的新梢cDNA文库，并对龙井43文库进行较高通亮通量的EST 测序和生物信息学分析。本研究获得的主要结果如下： 1． A的mRNA，LD-PCR 以Trizol一步法从春茶新梢中提取总RNA，分离纯化富含P01y 的滴度分别为6．8x105pfu／mL和4×105pfu／mL，符合高质量文库的要求，。文库的重组 率为98，05％和96．15％，且插入片段的长度在1．0．1．5kb左右，说明文库是完整的、有 效的。两个文库总克隆数分别为3．5x105个和2．1x105个．高于所需标准。 2． 上引入2个跚酶切位点后，构建了一个新载体sl豇-puc。用新载体构建一个用于测 序的质粒文库。 3． 从龙井43新梢cDNA质粒文库中随机选取4320个克隆进行测序，根据EST标准获得 长度大于200bp的有用序列为2963个，测序成功率为占总克隆的68．60％。通过