目的基因扩增方案与萝卜过氧化物酶rsprx1的扩增.docVIP

目的基因扩增方案和萝卜过氧化物rsprx1的扩增 实验目的 学会自行设计PCR反应体系和条件。 为萝卜过氧化物基因扩增提供依据。 学习并掌握PCR扩增技术的原理和基本操作。 实验原理 具体方案 配制PCR反应体系 10*缓冲液 2.0微升 总反应体积20微升 上游引物 0.8微升 下游引物 0.8微升 2.5mmol/LdNTP 0.4微升 25mmol/L Mgcl2 1.6微升 模板DNA 0.5微升 TaqDNA聚合酶 0.4微升 重蒸去离子水 13.5微升 按顺序将各成分加到一无菌0.2离心管，用手指轻弹离心管底部，混匀溶液，在台式离心机中离心2s以集中溶液于管低。 PCR反应过程及条件 预变性 94摄氏度 5min 变性 94摄氏度 30s 30个循环 复性 54摄氏度 30s 延伸 72摄氏度 30s 最后一次延伸 72摄氏度 10min 保存 4摄氏度 根据情况定 实验步骤 打开PCR仪，使盖加热到一定温度，变成热盖。 按目的基因扩增方案进行操作。PCR仪运行了一个周期才能离开。 实验结果 分析： 根据提供的上下游引物查得该基因为萝卜过氧化氢酶基因，全长346个碱基对，具体核苷酸顺序为ggttgtgatgcatcgatcctgctggacagttccacatctttcaggaccgagaaagatgctgctccaaacgctaattcggctagagggtttgac