细粒棘球蚴AgB8_2基因的原核表达和免疫学鉴定.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告 · B IO TECHN OLO G Y　BULL E T IN 2009年第 11期 细粒棘球蚴 A gB 8 / 2 基因的原核表达及免疫学鉴定 陈献威 　王志钢 　王红霞 　毕玉新 　李树裕 　李洁 　王媛媛 (内蒙古大学生命科学学院 哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室 ,呼和浩特 0 1002 1) 　　摘 　要 : 　旨在克隆细粒棘球蚴 A gB 8 / 2 基因 ,优化原核表达体系 ,鉴定纯化蛋白并初步确定其诊断价值 。采用 R TPCR 扩增 A gB 8 / 2 基因 cDNA ,构建原核表达载体 p ETA gB 8 /2 并在大肠杆菌 BL2 1 (D E3) 中表达 ,优化表达条件 。纯化的 A gB 8 /2 融合蛋白经 W e stern b lot鉴定正确后 ,采用斑点免疫金渗滤法初步验证其血清学诊断价值 。结果显示 ,克隆的 A gB 8 / 2 基因包 含了 273 bp 的完整 ORF,序列分析表明与其它已报道的 A gB 8 / 2 cDNA 序列的同源性在 99% ～100%之间。优化的表达条件 为 ,当菌液 OD600值为 0. 6 时 ,加入终浓度为 0. 05 mmo l/L 的 IPTG, 37 ℃,振荡培养 5 h。纯化的蛋白经 W e stern b lot鉴定为 目 的蛋白。克隆的 A gB 8 / 2 基因高度保守 ,原核表达载体 p ETA gB 8 /2 构建正确并高效表达可溶性融合蛋白,可作为特异性抗原 应用于斑点免疫金渗滤法检测血清抗体 。 关键词 : 　细粒棘球蚴 　A gB 8 / 2 基因　基因克隆　原核表达 　斑点免疫金渗滤法 Prokaryotic Expression and Imm unolog ic Iden tif ica tion of AgB8 /2 Gene from Ech in ococcu s granu losu s Chen X ianwei　W ang Zh igang　W ang Hongxia　B i Yuxin　L i Shuyu　L i J ie　W ang Yuanyuan ( Colleg e of lif e S cience, InnerM ong olia Un iversity, The Key L abora tory of M amm a l ) R ep roductive B iology and B iotechnology, M in istry of E duca tion, H uhhot 0 1002 1 　　Ab s tra c t: 　 It aim ed at clon ing the A gB 8 /2 gene from E ch inococcus g ranu losus and exp ressing fu sion p rotein in E. coli BL2 1 (D E3) followed by immunologic iden tification w ith W estern b lot and diagno stic value w ith dot imm unogo ld filtration a ssay (D IGFA ) . A gB 8 / 2 gene wa s amp lified from E ch inococcus g ranu losus by R TPCR , and then wa s cloned in to p ET44 a ( + ) to con struct the p rokary