鲁米诺及衍物功能化的金纳米材料及其在化学发光生物分析中的应用.pdfVIP

摘 要 摘 要 论文首先综述了各种化学发光体系、多种功能化纳米材料合成及性质以及纳 米材料参与的化学发光生物分析的研究现状。目前，带有化学发光的功能化纳米 金材料的研究受到了人们的关注，但关于其合成的则鲜有报道。目前，构建化学 发光功能化金纳米材料的方法是将化学发光分子直接通过桥联分子嫁接到金纳 米材料的表面。这些化学发光分子包括钌的配合物和鲁米诺。尽管这些方法对于 生物分析有很高的灵敏度，但是仍存在一些缺点。例如，操作过程需要多步反应、 沉淀洗涤、减压蒸馏、过滤、分散等多个步骤才能完成，非常麻烦、耗时。这些 缺点限制了这些方法的实际可应用性。基于此，本论文以化学发光功能化纳米金 材料的合成及其在生物传感器中应用为研究对象。利用化学发光试剂同时作为还 原和保护试剂，发展了两种常温下合成发光功能化纳米金材料的方法，制备出既 具有金纳米粒子特性又能保持发光试剂发光活性的功能化纳米金材料，并以发光 功能化纳米金为基元构建了免疫和DNA 生物分析探针，探讨了其在化学发光和 电致化学发光生物分析中的应用；分别以发光试剂和发光功能化纳米金为标记 物，发展了两种基于纳米金放大技术的超灵敏电致化学发光免疫传感器。主要研 究内容如下： 1. 基于 N-(4-氨基丁基)-N- 乙基异鲁米诺为发光标记物和纳米金放大技术， 构建了一种新型的电致化学发光免疫传感器测定人免疫球蛋白G （IgG ）。首先一 抗可以有效的被直接固载到纳米金修饰电极上，然后通过双抗夹心的模式将被测 物抗原和ABEI 标记的二抗固载到修饰电极上，形成电致化学发光免疫传感器。 在双阶脉冲的电化学方式下，对人IgG 的检测浓度范围为5  100 ng/mL ，以三 倍信噪比（S/N = 3 ）计算，其检测限为1.68 ng/mL。通过平行测定9 次浓度为 60 ng/mL 的人IgG 对该免疫传感器重现性进行评价，测定的相对标准偏差为3.79 % 。该传感器的使用十分简单，灵敏度高，已被成功用于实际人血清样品中IgG 的检测。 2. 建立了一种基于鲁米诺功能化纳米金同时作为标记物和发光物以及纳米 金和生物素与链酶亲和素体共同放大作用的新型超灵敏电致化学发光免疫传感 器。生物素化的一抗可以有效的被固载到连有链酶亲和素的纳米金修饰电极上， 抗原和鲁米诺功能化纳米金标记的二抗随后通过双抗夹心的模式被进一步的固 载到修饰电极上，从而得到电致化学发光免疫传感器。在双阶脉冲电压的电化学 方式下，在含有1 mmol/L 过氧化氢的0.02 mol/L pH=9.8 碳酸盐缓冲为工作液中， I 摘 要 该免疫传感器表现出极好的电致化学发光信号响应。利用电致化学发光强度，测 定人IgG 的线性范围为7.5  100 pg/mL ，以三倍信噪比（S/N = 3 ）计算，检测限 为1.0 pg/mL。通过平行测定9 次浓度分别为30、50、70 pg/mL 的人IgG 对该免 疫传感器重现性进行评价，所得到的相对标准偏差的结果分别为 4.4% 、2.1% 、 2.6% ，证实此电致化学发光免疫传感器的重现性较好，该免疫传感器还被成功用 于对实际人血清样品中IgG 的检测。与分子、酶、量子点和其它纳米金为标记的 化学发光免疫分析方法相比，鲁米诺功能化纳米金用于标记时，标记过程十分简 单、快速且廉价。在原理上，该传感器可以被应用到其它基于抗原与抗体的生物 分子的测定。 3. 发现化学发光试剂N-(4-氨基丁基)-N- 乙基异鲁米诺能够在水相室温下， 通过种子生长法直接还原HAuCl4 制备出不同形态的化学发光功能化纳米金材 料。这种合成方法非常简单，不需要加入其它的稳定剂和还原试剂。利用紫外- 可见吸收光谱、X射线光电子能谱、透射电子显微镜和X射线粉末衍射等分析手 段对所合成的金纳米粒子的形貌和表面化学组成进行仔细研究。结果表明随着 ABEI 的量的增加可得到从球状、球状金纳米颗粒组装的链状、球状金纳米颗粒 组装的准网状到球状金纳米颗粒组装的网状的不同形态的金纳米材料。在金与氮 之间的弱共价作用下，N-(4-氨基丁基)-N- 乙基异鲁米诺及其氧化产物被连接在金 纳米颗粒的表面。同时，对所制得具有不同形态的金纳米材料的组装机理也进行 了探讨。进一步的研究所合成出的纳米