2012高二生物质疑解惑课件：5-1《DNA的粗提取与鉴定》（人教版选修I）.pptVIP

(1)实验材料选用鸡血细胞液，而不用鸡全血，主要原因是鸡血细胞液中有较高含量的________。 (2)在图A所示的实验步骤中加蒸馏水的目的是________，通过图B所示的步骤取得滤液，再在溶液中加入质量浓度为2 mol/L的NaCl溶液的目的是____________________________________ (3)图C所示实验步骤中加蒸馏水的目的是___________________。 思维导图： 深度剖析　题图A、B、C所示为本实验的三个关键步骤。图A通过添加蒸馏水，血细胞与蒸馏水相混合而使血细胞处于低渗的环境之中，细胞因大量吸水而最终破裂，并释放出胞内物。图B通过纱布过滤使血细胞释放出的DNA滤入收集的滤液中(将大量胶状物滤出)，再在滤液中加入质量浓度为2 mol/L的NaCl溶液使DNA的溶解度增加。DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，如在质量浓度为0.14 mol/L的NaCl溶液中溶解度只有水中的1%，而在质量浓度为1 mol/L的NaCl溶液中的溶解度为水中的2倍。图C在DNA浓盐溶液中加入蒸馏水(大量)，可使溶液的NaCl浓度降至较低，由于DNA在较低浓度的NaCl溶液中溶解度很低(在质量浓度为0.14 mol/L的NaCl溶液中溶解度最低，浓度再变小则DNA溶解度将增大)，使DNA低渗析出，经过滤等手段可以收集到DNA。 答案　(1)DNA　(2)使血细胞破裂　使滤液中的DNA溶于浓NaCl溶液　(3)使DNA析出 易错提醒　DNA粗提取操作中两次加入蒸馏水及三次过滤的目的分析： (1)实验过程中两次加入蒸馏水，操作目的各不相同：第一次加蒸馏水，目的是使血细胞通过吸水涨破，释放出核内的DNA；第二次加蒸馏水，目的是稀释氯化钠溶液，使其浓度降至质量浓度为0.14 mol/L，最终使大量DNA析出。 (2)在DNA粗提取中三次过滤时，DNA存在的部分及所用的纱布层数不同： 第一次过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液，是为了得到含DNA的滤液，使用的纱布为1～2层。 第二次过滤含有黏稠物的NaCl溶液，是为了得到从低浓度的NaCl溶液中析出的附着在纱布上的含DNA的黏稠物，所用的纱布为多层。 第三次过滤溶解有DNA的NaCl溶液，目的是为了使DNA再溶解，所以只要用两层纱布即可。 单击此处进入 随堂达标检测 旁栏思考题 1．为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 解析　鸡血细胞与外界溶液相当于一个渗透系统，在蒸馏水中会发生渗透吸水，使细胞胀裂。 答案　蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA。 2．加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 答案　洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。 3．如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ 答案　研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。 4．此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ 解析　破碎的细胞通过过滤后，只能将体积较大的杂质除去，而与DNA体积相近的蛋白质、多糖和RNA等大分子物质都还存在。 答案　可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质。 5．为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？ 答案　用高浓度的盐溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐溶液使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。 6．方案二与方案三的原理有什么不同？ 解析　分离蛋白质和DNA的方法无非是利用物理或化学方法将二者分离。 答案　方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。 练习 1．答案　提取DNA的第一步是材料的选取，其目的是一定要选取DNA含量较高的生物材料，否则会由于实验过程中或多或少的损失而造成检测的困难；第二步是DNA的释放和溶解，这一步是实验成功与否的关键，要尽可能使细胞内的DNA全部溶解；第三步是DNA的纯化，即根据DNA的溶解特性、对酶及高温的耐受性的不同等特性，最大限度地将DNA与杂质分开；最后一步是对DNA进行鉴定，这是对整个实验的结果的检测。 2．解析　生物大分子的分离方法较多，但是对不同的生物大分子，应该选择不同的提取方法进行提取，一般地说，被提取的物质性质越稳定，分离的方法就越简单。 答案　提取蛋白质比提取DNA的难度大。这是因为与DNA相比，蛋白质对温度、盐浓度、pH等条件要敏感得多，很容易失活；并且蛋白质的空间