胰腺癌等肿瘤标志物(CA19-9)单克隆抗体制备及其检测方法的初步建立.pdfVIP

摘要 19．9，CAl9．9)是一类组成型表达糖蛋白，在正常 糖类抗原19．9(carbohydrateantigen 人和胰腺癌、胃癌等癌症患者血清中均能表达，但在正常人血清中的表达量普遍较低。 目前CAl9．9已是应用于临床的一类肿瘤标志物，它与多种癌症均具有相关性，其中尤 其与胰腺癌相关性较高，可达到约70％，因此，CAl9．9可以作为癌症相关性检测指标。 糖类抗原因免疫原性较弱，常规免疫效果所需免疫剂量与免疫周期均较高，因此增加了 单克隆抗体制备周期。本实验旨在通过对比新型佐剂与传统佐剂免疫的效果，结合半固 体培养基(甲基纤维素MC)克隆化法制备单克隆抗体，从而缩短单克隆抗体制备周期。 利用上述方法制备获得的CAl9—9单克隆抗体构建双抗体夹心ELISA检测方法，与国外 同类试剂盒进行性能对比，评价该检测方法优劣，探讨其是否可应用于临床检测及将来 的规模化生产。 免疫佐剂因可增强机体对抗原的免疫反应而被广泛使用，本实验选用Quick Antibody新型免疫佐剂与弗氏完全佐剂、弗式不完全佐剂分别对BALB尼小鼠进行免疫， 二者采取不同的免疫方式、免疫周期与免疫剂量，依据血清效价检测值评价免疫效果和 待融合小鼠。细胞融合后利用半固体培养基(甲基纤维素)克隆化法进行克隆化。获得 的阳性杂交瘤细胞株制备腹水后利用辛酸硫酸铵沉淀法进行纯化。经单克隆抗体鉴定 后，将合格的单克隆抗体进行配对，并进行检测体系探索，最终确立CAl9—9双抗体夹 心ELISA检测方法。 免疫效价结果表明：QucikAntibody免疫方式可在3周达到常规弗氏完全佐剂的免 U／ml_广300 0．9895。线性范围为30 U／mL。批内与批间精密性变异系数CV值均小于10％， 符合要求。稳定性：37℃、2℃．8℃分别放置6天后检测样本OD值与未放置前基 本相同，线性关系良好。依照构建的双抗体夹心ELISA检测方法与国外试剂盒对比检 11x+2．076。 测33份病患血清，二者相关性良好，r=0．9504，回归方程：Y=0．91 本实验最终得到3株阳性杂交瘤细胞，获得一对配对单克隆抗体，初步建立了 CAl9．9双抗体夹心ELISA检测方法。 夹心ELISA ABSTRACT CAl9·9isaclassofconstitutive was inbothnormalhuman expression glycoprotein．Itexpressed serumand whohascertaincancersuchas cancerand cancer．But，the patients’serum pancreatic gastric levelofCA19—9innormalhumanserumis 19-9isaclassoftumor generallylow．Currently，CA markers clinical isin correlationwithkindsof cancer． appliedby already，whichhigll Thecorrelmionrate to CAl9-9Canbe asa 70％．So used correlmiondetectionindexofcancer． appears Becausethe of antiis immunization weak,routine