以Bcl-2修饰的同种异体骨髓间充质干细胞移植对兔心梗后心功能不全的影响.pdf

目 录 中文摘要……………………………………………．1 英文摘要……………………………………………．4 研究论文经BCL．2修饰的同种异体骨髓间充质干细胞移植对兔心梗后 心功能不全的影响 前。言………………………………………………………………………………………．．8日U舌………………………………………………………………………………………．．西 材料方法……………………………………………………………．8 结果…………………………………………………………………20 附图…………………………………………………………………23 附表…………………………………………………………………29 讨论………………………………………………………………………………………30 结论…………………………………………………………………32 参考文献……………………………………………………………33 综述基因工程在骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死中的应用……．．36 致谢………………………………………………．45 个人简历……………………………………………46 中文摘要 经Bcl一2修饰的同种异体骨髓问充质千细胞移植对兔心梗后心功 能不全的影响 摘 要 目的：心肌梗死(M／，myocardial 胁。MI后心室重构的发生严重影响了MI患者的生活质量。MI后心功能 不全已成为患者死亡的主要原因。目前尽管MI的死亡率下降，但MI后 心功能不全仍未改善，已成为家庭及社会沉重的负担。心功能不全是各种 心脏疾病的终末阶段。药物治疗可以缓解病情，但是无法使受损的心肌细 胞再生。要使心肌细胞再生乃至衰竭的心脏恢复功能仍是一项巨大的挑 战。干细胞治疗对于逆转终末期损伤心脏是最有希望的治疗方法。间充质 stem ceils)存在于多种成体组织内，骨髓是 干细胞(MSCs。mesenchymal mallow MSCs的主要来源。骨髓间充质干细胞(BMSCs,bonemesenchymal stem cells)可参与受损心肌的重建，可以提高左室射血分数，降低左心室 收缩末期和舒张末期容积、减少梗死面积并改善左室重构。由于MI后微 环境的改变使BMSCs在梗死心肌中不能长期存活从而限制了干细胞的修 复能力。人们试图通过基因工程的方法来解决这一问题。基因工程是将外 源性基因导入目的细胞中，使得该细胞具备过表达或静默表达某种基因的 能力。对干细胞加以基因修饰，使干细胞具有更好的促血管再生、抗细胞 凋亡、抗炎、修复心功能的作用。外源性基因导入目的细胞中有病毒载体 系统和非病毒载体系统。非病毒载体的转导效率低。目的基因只能实现瞬 间表达，容易引发免疫反应和被机体所清除。本实验采用腺病毒转染 BMSCs，转染效率高，无毒副作用。Bcl．2是具有明显抑制凋亡作用的基 因，以Bcl．2修饰BMSCs可作为提高移植细胞存活率的手段。本研究目 的在于观察经Bcl．2修饰的同种异体BMSCs移植对兔心梗后心功能不全 模型心功能的影响。 方法：制备含目的基因Bcl一2的原始质粒。将目的基因Bcl．2从原始 毒质粒。大量制备重组质粒，共转染293细胞，收集病毒(P1代病毒)。 中文摘要 以P1代腺病毒感染293细胞，连续三代反复扩增收集病毒，至P4代行 病毒的大量扩增。经反复冻融后保存，于．80。C保存待用。采集3月龄兔 胫骨骨髓，用密度梯度离心法和贴壁法培养骨髓间充质干细胞至第九代。 用带绿色荧光蛋白标记的空载体腺病毒及带有Bcl．2基因的腺病毒分别转 染上述培养细胞。结扎冠状动脉前降支制作心功能不全模型。两周后根据 超声心动图结果选取造模成功模型，即左室射血分数(LVEF，left ventricular ejection ventricularfractional 缩短率(FS，lef