厚朴提取液对PD模型内质网应激和泛素-蛋白酶体系统的影响.pdf

中文摘要 研究背景 帕金森病(Parkinson 大神经退行性疾病。随着老龄化社会的来临，PD患病率正在世界范围内 逐年增高，据世界帕金森病协会近年资料显示，全球本病患者已超过400 万，我国居全球之首。因此帕金森病已经成为我国乃至世界各国面临的重 大医学和社会问题。 本病确切病因未明，现代医学缺乏理想效果的治疗药物，中医药厚朴 提取物单体在治疗PD的临床研究中积累了许多经验，但迄今未见中药厚朴 提取物在分子水平上阐明其对PD模型内质网应激与泛素一蛋白酶体系统影 响的机制。因此，为发挥中医药特色和优势，积极探索本病的中医药治疗 方法，对研究开发治疗帕金森病的中药新药有现实的意义． 研究表明：中脑黑质多巴胺(DA)能神经元变性缺失伴胞浆内Lewy 小体的形成是帕金森病的主要病理改变．而Lewy小体内主要聚集了许多蛋 径相关酶。现在普遍认为神经细胞的死亡是a-synuclein等蛋白构象改变， 形成淀粉样丝状物异常聚集所致。但目前研究大多在毒性蛋白质的生物合 tin 成途径，却少有研究其降解和代谢途径。泛素一蛋白酶体系统(ubiqui proteasomesys tem，ups)是细胞内重要的溶酶体外降解系统，它可以发 现和破坏这些装配和折叠错误的蛋白，使它们及时降解。因此，UPS的功 能异常是PD发病中一个十分重要的环节。 异常蛋白的不断聚集与uPs的功能缺损密切相关．最新研究发现：内 reticulum 质网应激(endoplasmic 重要的环节。当严重的或长时间的内质网应激损伤了内质网的功能时，即 基因的激活转录；2．JNK的激活通路；3．内质网特有的半胱氨酸蛋白酶 caspase-12的激活。此外，研究还表明内质网应激反应的标志性蛋白是 也是ERS的应激标志。而长期的应激则启动凋亡通路，损伤细胞。 当今，ERS和UPS已成为国外研究的热点，但还未研制出能够有效干预 白。 现代医学对本病的治疗药物主要有多巴胺类和多巴胺受体激动剂，早 期效果显著，但有副作用大，价格昂贵，长期应用逐渐耐药等缺点。因此， 积极探索中医药治疗显的更有重要意义。 本病属于中医颤证范畴，导师吴正治教授对本病病机有新的学术观 点。认为：本病的病位主要在肌肉，其四大主症震颤、肌强直、运动迟缓、 姿势步态异常都和肌肉密切相关，根据中医学脾主肌肉的理论，本病应从 脾论治。吴教授认为本病病机，其本在脾。脾虚水湿不化，湿性黏滞，易 阻气机，湿困肌肉、气机不畅故身体重着、运动迟缓；脾虚则气血生化无 源、筋失所养、血虚生风故肢体震颤、肌肉强直、姿势步态异常。著名中 医脑病专家任继学亦认为本病“以脾为根，以肝为标。因此，认为本病 的病机关键为“脾湿困阻、气机不畅、肌肉失主”，其治疗当以醒脾理气 化湿为要，辅以活血柔肝止痉。 厚朴提取液是导师吴正治教授在所承担的国家十五科技攻关项目 “帕金森病中西医结合综合治疗优化方案研究骨的工作期间，以古今文献 相关方药经过系统整理，结合多年科研和临床经验及其所提出的本病新的 中医观点，经筛选优化而出的天然中药．其经过多年临床应用，对早中期 帕金森病疗效显著，对晚期帕金森病患者也有一定疗效。这为本课题研究 打下了良好的基础。 研究目的 本课题结合帕金森病研究的新进展新动态，采用连续注射MPTP诱导模 Ⅱ 拟人的帕金森病慢性病程和具有病理Lewy小体形成的动物模型，探讨ERS、 UPS在帕金森病发生发展中的作用；同时观察天然中药厚朴提取物对帕金 与分子机理，为进一步开发治疗PD中药新药提供实验依据，并为本病临床 治疗开辟新思路。 研究方法 (1)建立PD模型及实验分组 6只。 为PD模型组16只，正常对照组16只，厚朴提取液组1 (2)动物行为学观察 为的变化，共记录30min取平均值。同时注意观察震颤、活动迟缓、抓握、 嗅探等异常行为。 (3)黑质区TH、GFAP、0X-42免疫组化检测 注射后第21天，在2．5％戊巴比妥钠麻醉下，从左心室插管灌注4％多聚 甲醛，之