根皮素酰腙衍生的合成及其生物活性研究.pdfVIP

IIIItlllllllllllllllllrlllIllIIII Y2403143 摘要 摘要 根皮素(Phloretin)属于二氢查耳酮类化合物，是一种具有活性的天然物质， 广泛的存在于苹果、梨、草莓等多汁水果的果皮及根皮中。根皮素能够抑制黑 色素在皮肤中的生成和聚合，皮肤增白效果明显，且优于当前化妆品行业中常 用的美白添加剂曲酸和熊果苷。此外已有研究发现根皮素具有很多的生物学活 性，国内外论文报道有抗氧化能力，降血糖能力，抗癌能力，抗炎能力等功能， 但其中对根皮素的化学修饰的报道却并不多见。酪氨酸酶(Tyrosinase)是一种 铜结合蛋白，是黑素代谢的关键酶，在机体内形成黑色素中起到关键作用。研 究安全有效酪氨酸酶抑制剂也是国内外研究的热点。本文选择天然产物根皮素 为研究对象，与苯甲酰肼，水杨酰肼，对羟基苯甲酰肼反应合成了3种新型酰 腙化合物：根皮素苯甲酰腙(1)，根皮素2．羟基苯甲酰基腙(2)和根皮素4． 羟基苯甲酰基腙(3)，并利用紫外、红外、熔点测定、核磁、质谱等手段进行 了表征。希望通过化学反应修饰，在根皮素上加上活性基团来进一步提高其生 物活性，并且为扩展根皮素的研究领域提供一些实验理论依据。本论文主体包 括四个部分： 第一章：相关文献综述。本章简要介绍了近些年来国际上根皮素的研究动 向进展，以及简要概括了酰腙类物质的生物学功能。并介绍了酪氨酸酶的研究 现状，酶抑制剂的研究方法和研究现状。阐明了本课题的研究目的和意义。 第二章：合成和表征部分。选用3种酰肼类物质，苯甲酰肼，水杨酰肼和 对羟基苯甲酰肼，在适宜条件分别与根皮素反应，合成了根皮素苯甲酰基腙， 根皮素2．羟基苯甲酰基腙和根皮素4．羟基苯甲酰基腙这3种新型根皮素修饰物。 NMR，13CNMR等手段对其进行了结 采用紫外光谱，红外光谱，熔点测定，1H 构表征。 第三章：抗氧化活性实验。在实验条件下，对根皮素及3种酰腙衍生物的 抗氧化活性进行了测定。抗氧化活性实验包括还原Fe3+能力，清除DPPH自由 基，ABTS自由基能力及保护蛋白质氧化损伤能力。实验结果表明，在不同的抗 氧化模型中，各物质表现出的能力不尽相同，作用机理也不完全一致。3种根皮 素酰腙衍生物在还原能力、清除DPPH自由基能力、ABTS自由基能力和蛋白质 损伤保护能力活性实验中都表现出了显著活性，且优于母体根皮素。化合物2 摘要 和3分别在芳酰基的邻位和对位含有一个羟基，它们的抗氧化活性均强于化合 物1。对物质构效关系探讨表明，化合物芳酰基苯环上羟基的个数和位置在清除 自由基能力中发挥着关键作用。 第四章：抑制酪氨酸酶活性实验。考察了根皮素及3种酰腙衍生物对酪氨 pM)有了明显提高。化合物1与根皮素 gM)相比母体根皮素(IC50=23．7士1．8 半抑制率相当。结果表明，化合物芳酰基苯环上羟基数目和位置在抑制酪氨酸 酶中起着关键作用。对物质的酶抑制动力学研究，结果表明4种物质均是酪氨 酸酶的可逆抑制剂，抑制类型均为混合型。化合物抑制酶活性是通过降低酶活 力来实现，而并不是降低有效酶量。化合物既能跟游离酶结合也能和酶．底物复 合物结合。此外还应用荧光光谱法研究了化合物与酪氨酸酶之间相互作用。结 果表明，化合物2与酶发生特异性结合，生成新的物质，荧光发射峰红移且强 度显著增强。根皮素和化合物1、3对酪氨酸酶荧光发生猝灭作用，且均是形成 1：1复合物的静态猝灭。利用吸收光谱研究了化合物与Cu2+的相互作用。结果表 明除根皮素外，铜离子的存在能使化合物1．3的吸收光谱发生明显变化。根据以 上结果推测，化合物抑制酪氨酸酶活力与芳酰基苯环上的羟基和化合物结合 Cu2+的能力有关。 关键词：根皮素；酰腙；合成；抗氧化；抑制酪氨酸酶 II ABSTRACT