MES23.5胞PKC对IRP1的调节作用研究.pdf

MES23．5细胞PKC对IRPl的调节作用研究 摘 要 帕金森病(Parkinson’Sdisease，PD)是一种多发于中老年的中枢神经系统退行性 疾病，以运动不能、肌僵直、静止性震颤及姿势反射障碍为特征性表现，其病理学 特征是黑质致密带多巴胺能神经元的脱失以及由此而导致的纹状体多巴胺的耗竭。 但迄今为止，虽然遗传、环境和氧化应激等因素对PD发病可能均起到一定的作用， 但其确切病因尚不完全清楚。目前大量的研究证实，黑质铁聚积参与了PD的发病。 铁通过Fenton反应促进过氧化物的降解产生大量的羟自由基造成细胞的死亡；在PD 动物模型中应用铁离子螯合剂可起到明显的神经保护作用。本实验室的fj{『期研究表 低参与了PD黑质铁的聚积，而Fpnl的表达降低是由铁调节蛋白(ironresponsive kinase C，PKC) 的调节，但此调节具有组织特异性，因此本研究拟探讨在多巴胺能神经元细胞系 的哪些亚基以及是否通过激活这些亚基调控了IRPl进而实现其对细胞铁水平的调 控。具体结果如下： 1．0．01—2．0 I．tmol／L PKC激动剂佛波醇酯(Phorbol12．myristate 调∽0．01)，2I-tmol／L I PMA和2I_tmol／LBisI共同作用 (垮0．01)相比IRPl蛋白表达下调，0．21上mol／L 组相比，IRPl蛋白表达明显降低(正O．01)。 3．0．2pmol／L (胙o．05)，21amol／L BisI PMA和21xmol／L 组(∥0．01)相比Fpnl蛋白表达明显上调，0．2ptmol／L 表达明显降低(正0．01)。 4．0．21．tmol／L 21xmol／L (萨0．05)， BisI共同作用MES23．5 铁转出功能增强(∥O．01)，0．2p．mol／LPMA和21imol／L 铁转出功能明显降低(∥O．01)。 PKC8亚基磷酸化水平在lh处明显增加(∥0．05)。 PKC亚基磷酸化水平在6h和12h处明显增／J日(pO．05)。 7． PKCs亚基磷酸化水平没有变化O，0．05)。 水平明显增加(pO．05)，预先用1l_tmol／L 而进一步证明PKC8亚基能够被6-OHDA激活。 水平明显增加(∥O．05)，ll上g,mLPKCPseudo—substrate (pO．01)，预先用1p．g／mLPKC‘Pseudo．substrate inhibitor组相比明显增加 比明显降低(∥0．01)，与1lag／mLPKC‘Pseudo—substrate 够被6．OHDA激活。 增／JnO：,o．01)，1I_tmol／L 蛋白表达-Vi周(pO．05)，预先用1lamol／L 6-OHDA能够通过激活PKC5亚基使IRPl蛋白表达上调。 PKC(Pseudo-substrate 上调(萨O．01)，预先用11．tg／mL 达上调。 表达上调，IRPl激活引起了铁转出蛋白Fpnl蛋白表达降低，进而导致了细胞铁转 或PKC(亚基使IRPl蛋白表达上调，本研究使我们对PD黑质铁聚积的机制有一个 更深入的认识，并且能为PD药物治疗提供有效的作用靶点。通过抑制P