miR-193在t(8;21)易位的急性髓系白血病发生中的作用及功能研究.pdf

中文摘要 中文摘要 leukemia， 目的：t(8；21)(q22；q22)位是急性髓系白血病(Acutemyeloid AML)中最常见的染色体易位，易位主要累及21号染色体的急性粒细胞白血 终形成AMLI-ETO融合基因，它在所有的AML中其发生率为12％～15％，在 抑制AMLl靶基因转录，从而使AMLl靶基因表达沉默；AMLl．ETO也可以 诱导一些基因的转录(如c-jun)导致细胞周期失控引起细胞增殖；AMLl．ETO 还能选择性抑制粒细胞分化，抑制正常造血功能。目前认为AMLl．ETO的形成 会增加基因组的不稳定性，从而对一些重要基因产生影响，研究表明c．kit表达 产物的功能性激活与AML的发生密切相关(大约有70％的AML病人c．kit受 易位产生的AMLl．ETO融合蛋白引起的造血分化受抑和随后的凋亡受抑，再加 上持续活化的C．KIT赋予造血细胞以增殖和生存优势，两者协同引起AML的 发生，这就是白血病发生的二次打击学说。C．KIT是III型跨膜蛋白酪氨酸激酶 受体蛋白家族成员之一，研究表明C．KIT的持续性激活会引起P13K／AKT信号 D1都是 途径的异常活化从而导致细胞增殖，凋亡受抑。Mdm2和Cyclin P13K／AKT信号途径中的关键分子，它们的异常能直接导致细胞的凋亡和增殖。 因子的负调控因子和效应基因，它的转录可以被p53激活，但是如果p53稳定 在一个水平而Mdm2却被持续激活，这样就会造成Mdm2的高水平，从而通过 D1蛋白，属于细胞周 P13K／AKT信号途径抑制细胞凋亡。CCNDl编码Cyclin D1具有CDK激酶的功能，它能够控制G1／S期的转换。 期蛋白家族，Cyclin D1的突变、扩增都会引起细胞周期的失控，并且它还和肿瘤的发生发展 Cyclin 密切相关。MiR．193a是我们在AMLl．ETO阳性的细胞系和临床样本中筛选到 中文摘要 过来也能够结合到miR．193a的核心启动子区并招募DNMT、HDAC对其表观 达。本研究旨在探讨t(8；20易位急性髓系白血病中，miR．193a对细胞分化、细 胞凋亡和细胞增殖的影响。 的3’UTR区的结合情况。RT-PCR和WesternBlot检测临床病人样本和正常人 水平和蛋白水平。用流式细胞术检测miR．193a处理的细胞的分化、凋亡和周期。 D1的抑制作用以及其肿瘤抑 最后在裸鼠体内验证miR-193a对Mdm2、Cyclin 制功能。 ． D1 miR193a RT-PCRWesternBlot 是 的靶蛋白； 3’UTR，也即Mdm2和Cyclni．和 Mdm2和Cyclin 的水平达到一种正常的平衡；用流式细胞仪检测miR．193a处理后的细胞，发现 细胞不仅能发生分化而且细胞的凋亡增加，大部分细胞被阻滞在G1期，S和 G2期细胞比例大幅下降；细胞克隆形成试验证明miR．193a能明显抑制细胞的 增殖，同时观察稳定转染miR．193a的SKNO．1细胞的形态，其细胞核质比明显 降低，说明miR．193a能促进细胞分化；体内实验验证了miR．193a具有抑制肿 瘤细胞增殖的作用，是一个抑癌基因。 直接作用于这些基因，降低其表达从而减少细胞增殖，促使细胞凋亡和分化。 关键词：t(8；21)易位；miR．193a；P13K／AKT信号通路 Abstract Abstract isthemost translocationinAcute Purpose：The(8；21)t