pIRES2-GFP-hIL-12-HSP70真核表达载体的构建及对7402肝癌细胞生长的影响.pdf

Pl RES2-EGFP-hI L-1 细胞生长的影响 中文摘要 双功能融合蛋白分子。 2000将以上 ime 7402／0。通过倒置荧光显微镜检测各组细胞的绿色荧光表达情况；Real-tPCR检 测各重组外源基因在7402肝癌细胞中的表达差异；MTT法检测细胞生长情况；用 心inv-FITC／PI双染法检测细胞凋亡率。 -HSP70构建成功，通过PCR扩增、酶切及DNA测序证实各插入基因及联合基因的大 小、位置、方向均正确无误；各转染组细胞在转染后24h、48h、72h均可在倒置荧光 显微镜下观察到绿色荧光；Real-timePCR证明各重组外源基因在已转染重组真核 7402／HSPTO组、7402／PE组的差异均有显著性(PO．05)。 2 同增强作用。 关键词：肝癌；hIL-12；HSP70；基因治疗 3 o ‘ o ‘o r一’ ● 。lhe vectorconstruCtlOnOI eukawoticexoresslon anditsinfluenceonthe plRES2-EGFP—hlL一12-HSP70growth of7402livercancercell Abstract istoobtainthefusion moleculeswith ofhIL-12 Objective：Thisproject protein activity andHSP70 the vectorof 2 bYconstructingeukaryoticexpression plRES2·EGFP-11IL·1 its in7402livercancercellsand itsinfluenceon -HSP70，detectingexpression observig the of7402livercancercell． growth Methods：hIL··12was from PCRandHSP70 gene amplified by pBll21··ML·-12plasmid Wasobtainedfrom two werecloned gene pShuttle-CMV-HSP70plasmid，Thetargetgenes into to constructionrecombinant vector, plRES2-EGFP eukaryoticexpression and by plRES2一EGFP-hlL一12，plRES2-EGFP-HSP70 gene recomb