中国科考队员赴级前后外周血淋巴细胞生物钟基因Clock和Bmall昼夜节律性转录解析.pdf

中国科考队员赴南极前后外周血淋巴细胞生物钟基因Clock和BmalI昼夜节律性转录解析中文摘要 中文摘要 人和动物的生理机能、生化代谢、行为表现等常以24 h为周期发生规律性变动， 这种变化的节律称为昼夜节律。产生昼夜节律的结构基础是分子计时器一昼夜节 律生物钟(circadianclock)。对于主导节律调节的一些重要基因，称之为生物钟基 因。机体的各种内在昼夜节律性变化可在外界环境因素的作用下得到重设性调节， 以使机体活动与环境变化达成和谐统一。 引发和调控昼夜节律生物钟的分子机制是在钟输入信号(如光照、温度等) 的作用下，若干钟基因、钟相关基因和钟控基因及其蛋白产物通过转录—翻译一 翻译后事件的相互衔接，组成钟振荡器的自身调控反馈环路，实现钟信号的精确 24h节律性表达于中枢钟组织如视交叉上核与松果体，而且也表达于包括血细胞在 内的各种外周钟组织。上述基因产物以杂二聚体形式形成正向转录因子，与下游 荡机制中被认为起着极其重要的作用。然而，有关人外周血淋巴细胞核心钟基因 明，这正是本文所要探讨的内容。 目的 律性表达规律，旨在解析、拓展特殊环境下人类外周免疫钟运行的分子调控机制。 方法 极前在昼夜节律模式条件(自然光制，16 h-dark h-light：8cycle，LD)下生活1周：室 温25+1 8：00，午餐时间：1 Lux； 受试者自由饮水，无烟酒嗜好，在过去6个月内未做过跨时区旅行和未接受过药 物治疗，日常活动和饮食成分基本一致。随后在一昼夜内，随机选择2位受试者， 中文摘要 中国科考队员赴南极前后外周血淋巴细胞生物钟基因Clock和Bmall昼夜节律性转录解析 ml，血样采集在4个不连续的随机昼夜内完成。分离其 每隔4h抽取各自外周血6 淋巴细胞，提取总RNA，逆转录为eDNA，采用实时荧光定量PCR方法，测定不 同昼夜时点(zeitgeber 基因的mRNA表达量，并以熔解曲线和凝胶电泳条带加以验证，通过余弦法和Clock Lab软件获取节律参数，并经振幅F检验分析是否存在昼夜节律性表达。 选取相同8名男性科考队员，赴南极后生活一年，经历了极昼与极夜光照差 异、季节与气候差异、气温与气压差异等自然环境变化。其昼夜模式生活条件、 采血方式、取样时间、实验检测方法及数据统计学处理同上。 结果 1．科考队员赴南极前外周血淋巴细胞核心钟基因Clock和BmaH的昼夜表达 mRNA表达呈现明显的昼夜节律性振荡(振幅F检验，P0．05)； 1．2 ．14．85土1．32： 1．3 ．2．74士0．71和．8．25士2．33； 1．4 较BmalJ基因降低；从昼夜节律性参数比较看出，两个基因表达的峰值相位、振 显的昼夜节律性(振幅F检验，P0．05)； ．8．23士0．53和．9．81士0．05； H 中国科考队员赴南极前后外周血淋巴细胞生物钟基因Clock和Bmall昼夜节律性转录解析中文摘要 ．7．46a=0．41和一9．5411．04： 2．4 其昼夜节律性参数变化均无显著性差异(P0．05)； 2．5其他队员的上述两个基因不表现明显的昼夜节律性转录特征(振幅F检验， 时点的表达量均低于Bmall基因(尸．o．05)。 律性转录的比较 夜节律性表达，与赴南极前相比，除昼夜时点ZTl8和ZT22以外，在其它时点的 增大、谷时mRNA水平增大(尸O．05)，峰时和谷时分别推迟约5个小时。 夜节律性表达，与赴南极前相比，除昼夜时点ZTl0和ZTl4以外，在其它时点的 表达量均下调(Po．05)。队员赴南极后Bmall基因的节律性表达峰值相位推后， 振幅、中值和峰时mRNA水平均下降(尸如．05)，峰时和谷时分别推迟约16个小时。 结论 1．赴南极前，在LD(16：8)自然光制下，科考队员外周血淋巴细胞核心生物 基因各昼夜时点的表达水平、中值以及峰时mRNA水平和谷时mRNA水平较 Bma