人CD4胞外区人和小鼠MHCⅡ分子胞外区的表达及活性鉴定.pdf

摘要 摘要 CD4分子在机体免疫系统中起重要作用，它与MHCII、TCR相互作用，形成 CD4．MHCII-TCR复合物，介导特异性抗原呈递以及激活CD4+T细胞，引发机体 特异性的免疫应答。同时，CD4是HIV感染的宿主细胞上主要受体，CD4融合蛋 白的药物及CD4的抗体在艾滋病的临床研究中显示了良好的治疗效果。 本研究尝试通过真核及原核表达系统对人CD4蛋白胞外段进行表达。真核 表达中，应用CHO细胞和293FT细胞分别表达CD4蛋白胞外段，仅含有信号 肽的序列有小量表达。原核表达中，应用大肠杆菌BL21菌表达的人CD4胞外 段不同域以包涵体的形式存在，经尿素变性及复性，再经分子筛纯化之后，其纯 是有活性的。因此通过大肠杆菌这一原核表达系统表达的人CD4蛋白胞外段不 同域，可用于进一步分析CD4抗体的结合表位及动物免疫等研究。 本研究还通过大肠杆菌ER2566原核表达系统对人及小鼠MHCII蛋白胞外 段进行表达。目的蛋白同样以包涵体的形式存在，经尿素变性及复性，再经分子 筛纯化之后，其纯度能够达到90％以上。经竞争实验和Cell Kit-8检测， Counting 表明小鼠MHCII蛋白胞外段a链有活性，其他蛋白无活性或低活性，可能与氨 基酸突变有关，需要进一步实验验证。 CD4MHCII 关键词：HIV 原核表达中和实验 V Abstract Abstract Inthe immune moleculean role，which body’S system，CD4playsimportant mediates andinitiates immune by antigen specific responses specific presentation trimolecular CD4-MHC surfaceCD4 forming complexes II-TCR．Meanwhile，cell HIVinfectedhostcell’Smain results moleculeisthe goodtherapeutic receptor,and havebeendemonstratedtheuseofmedicineCD4andsomeanti—CD4 by fusing clinical antibodiesin趟DS research． this extracelluarofhumanCD4is tobe In attempted sudy，the region separately and the the the eukaryoticprokaryoticsystem．Ineukaryotic expressedthrough extracelluar