人羊膜负载羊膜充质干细胞修复皮肤创作的研究.pdf

目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………·1 英文论著摘要……………………………………………………………………·3 二、英文缩略语………………………………………………………………………“6 三、论文 氤f言…………………………………………………………………………………………………………·1／ 日IJ苦…………………………………………………………………………………………………………‘ 材料与方法………………………………………………………………………·8 实验结果…………………………………………………………………………13 讨论………………………………………………………………………………………………………”23 结论………………………………………………………………………………………………………一26 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………27 五、参考文献…………………………………………………………………………·28 六、附录 综j签………………………………………………………………………………………………………“32 在学期间科研成绩………………………………………………………………”43 致谢………………………………………………………………………………………………………”44 个人简介…………………………………………………………………………45 冲文论著摘要· 人羊膜负载羊膜间充质干细胞修复皮肤创伤的研究 背景及目的 皮肤作为一种特殊的器官，是人类与外界接触的第一道屏障，它是机体免于 脱水、损伤、感染的第一道防线，是维持内环境稳定和阻止微生物、化学物质等 侵入的屏障【1，2引。皮肤创伤愈合较为复杂，尽早修复缺损皮肤并最大可能恢复功 能与外观己成为治疗重要目标，促进皮肤创伤愈合具有重要的理论和实际意义 【45】。传统修复方法有：自体植皮、同种异体植皮、异种植皮和人工合成皮肤产品 的应用[6】。但无论同体或异体皮移植均受到供体来源的限制，异体皮和人工合成 皮肤代用品的移植还受到发生免疫排斥反应的困扰【7，81，寻找一种理想的皮肽替代 物一直是临床上一个亟待解决的难题。 人羊膜(HAM)是一种天然高分子生物材料，含胶原、糖蛋白、蛋白多糖、 整合素和板层体等多种成分，它表达多种生长因子及其mRNA的相关蛋白，有利 于细胞的生长繁殖，可促进上皮形成，抑制炎症和新生血管形成，还可以抑制纤 维化减少瘢痕形成，并可作为细胞移行生长的良好支架，有利于组织修复【91。人 羊膜问充质干细胞(hAMSCs)，具有高度自我更新能力和多向分化潜能，易在体 外培养，并能大量扩增，有遗传性状稳定，增殖能力强，低免疫原性等生物学特 性，并能产生大量生长因子【10,11】。 本实验将HAM负载hAMSCs，覆盖于SD大鼠皮肤创面，观察它们对创面愈 合的作用，同时检测各组中皮肤CKl9阳性细胞的分布和血管上皮生长因子 (VEGF)表达，判断表皮干细胞和血管生成情况。 方法 1、原代分离培养hAMSCs：将新鲜羊膜用PBS液反复清洗，采用胰蛋白酶． 胶原酶联合消化法分离人羊膜间充质干细胞，使用含10％FBSDMEM／F12培养基 培养人羊膜问充质干细胞。 2、hAMSCs的鉴定：采用免疫细胞化学和流式细胞术分析其表型特征。 度种于羊膜上，加入DMEM／F12培养液培养。 4、建立大鼠全层皮肤创伤模型：在大鼠背部做2cm×2cm创面，形全层皮肤 缺损，创面随机分为三组：对照组、羊膜组、羊膜负载hAMSCs组。 5、免疫组化染色：用免疫组织化学染色法观察各组大鼠皮肤修复中CKl9阳 性细胞的分布和VEGF表达情况。 6、统计学分析：实验所得数据以(X士s)表示，用t检验比较组问差异，用 SPSSll．5软件进行方差分析，P0．05为差异有统计学意义。 实验结果 1、从羊膜中成功分离出hAMSCs原代细胞，经过24h体外培养后有少量贴 壁细胞，6 d，细胞融合，形态比较均一，呈 d