云南萝芙木异胡苷合成酶基因的全长cDNA克隆与序列分析.pdf

摘 要 云南萝芙木是一种重要的药用植物，其中含有多种萜类吲哚生物碱 indole (terpenoid 等疾病的原料药。异胡豆苷合成酶催化色胺和裂环马钱子菅缩合生成 TIAs的共同前体物质3a(S)．异胡豆苷。它是云南萝芙木萜类吲哚生物 碱次生代谢的合成途径中重要的限速酶。现在尚未见从云南萝芙木中克 隆该基因的报道，因此研究云南萝芙木STR基因对于提高TIAs产量有 指导意义。本论文主要研究结果如下： 1)云南萝芙木STR基因的全长eDNA克隆。以云南萝芙木新鲜叶 片为材料提取RNA，将其反转录的eDNA作为模板，根据NCBI上已有的 Premier5．0设 萝芙木种中STR的核苷酸序列片段，用专业软件Primer 8．T 计特异引物，通过PCR扩增出STR基因，克隆产物经过插入pMDl 载体，以及转化大肠杆菌DH5a菌株等一系列操作之后送至生物公司测 序，克隆片断测序结果通过DNAMAN等生物信息学软件的分析，获得 了l038bp的STR基因的全长eDNA序列。 2)云南萝芙木STR的生物信息学分析。通过生物信息学软件 DNAMAN对测序结果进行分析：STR基因eDNA长度1 038p，含有一个 l STR与同种属蛇根木的STR蛋白序列相似性分别达到99％，与同科的 白质的氨基酸序列，应用一系列生物信息学软件对理化性质、高级结构 等进行预测分析，结果显示：STR蛋白等电点5．20，分子量38．4kDa， 32； 不稳定系数34．76，属于稳定蛋白质脂肪系数为86．70，平均亲水性．0．1 存在跨膜结构区域，N．端有一长度为27个氨基酸参与分泌的信号肽。二 级结构预测指出，延伸链和不规则盘绕是STR蛋白质最大量的结构元件， 而Q．螺旋和B．转角则散布于整个蛋白质。 关键词：云南萝芙木；异胡豆苷合成酶；eDNA克隆；生物信息学；功能 预测 ABSTRACT isan medicinal Tsiangimportant plant，which yunnanensis R口“volfia indole indole alkaloids， containsa of alkaloids(terpenoid terpenoid variety ofdiseasessuchas thebulk forthetreatment hypertension， TIAs)．It·S drugs a workas andcancer．Strietosidine catalytic．It sexual synthase dysfunction to and cond